JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 2:25 د • April 30th, 2023
الطعوم الغريبة لجنين الزرد مفيدة في دراسة غزو الخلايا السرطانية. قم بإعداد نماذج الطعم الغريب عن طريق حقن الخلايا السرطانية النقيلية والخلايا غير السرطانية المسماة بالفلورسنت في الفضاء المحيط لجنينين معدلين وراثيا. الفراغ المحيطي هو مسافة بين محيط الجنين وكيس صفار البيض. دع الأجنة تنمو للفترة المطلوبة.
خلال هذه الفترة ، تنقسم الخلايا السرطانية النقيلية بقوة في موقع الحقن بينما تظل الخلايا غير السرطانية مستقرة. بعد الحضانة ، استخدم ماصة باستور لنقل الأجنة إلى طبق تعليق زجاجي القاع. قم بإزالة ماء البيض الزائد وضع الأجنة في الموضع المطلوب للتصوير. احتفظ بقلة غطاء أعلى الطبق وضع الطبق تحت مجهر المجال الساطع.
التقط الصور وحلل السلوك الغازي لكلا النوعين من الخلايا. تميل الخلايا السرطانية النقيلية إلى غزو الأوعية الدموية من موقع الحقن. تتحرك على طول الدورة الدموية ، ثم تغزو الأنسجة المحيطة لتتكاثر. في المقابل ، تبقى الخلايا غير السرطانية في موقع الحقن. في بروتوكول المثال ، سنقوم بحقن خلايا سرطان الثدي في الفضاء المحيطي وقناة Cuvier في نماذج xenograft لأسماك الزرد لدراسة ورم خبيث.
لتصور ورم خبيث ، باستخدام ماصة باستور ، انقل جنين سمك الزرد المحقون إلى طبق بوليسترين زجاجي القاع وقم بإزالة ماء البيض الزائد. قم بتصوير جسم الجنين بالكامل باستخدام مجهر متحد البؤر تم ضبطه على تكبير منخفض للحصول على نمط عام لانتشار الخلايا السرطانية.
استخدم ليزر 488 نانومتر لتصور الأوعية الدموية لجنين الزرد وليزر 543 نانومتر لتصور الخلايا السرطانية المزروعة المسماة بعلامة فلورية حمراء. بعد ذلك ، قم بمسح الجنين في ثماني إلى عشر خطوات للحصول على صورة عالية الجودة.