مقايسة تكوين مستعمرة أجار الناعمة: طريقة لاختبار تأثيرات المركبات الجديدة على تكاثر الخلايا السرطانية

للبدء ، خذ تركيزا مناسبا من الاغاروز المنصهر في أنبوب مخروطي الشكل وأضف الكمية المرغوبة من وسط الثقافة الدافئة إليه. اقلبها برفق لخلط المحتويات. أضف هذا الخليط إلى كل بئر من ستة آبار ، واتركه يتصلب. هذه هي الطبقة السفلية. بعد ذلك ، عالج الخلايا السرطانية بالمركب محل الاهتمام وأضف التركيز المطلوب من الاغاروز.

الآن ، صب هذا الخليط الذي يحتوي على العدد المطلوب من الخلايا لكل مليلتر في كل بئر. هذه طبقة تحتوي على خلية. بمجرد أن يصلب الوسط ، احتضن اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة أسبوع. قم بإعداد طبقة مغذية عن طريق خلط الاغاروز إلى الوسط واستكمال هذا الخليط بمركب الاهتمام. أضف طبقة التغذية هذه برفق في كل بئر ، واتركها تتصلب ، واحتضن اللوحة عند 37 درجة مئوية.

كرر إجراء التغذية هذا أسبوعيا لتجديد الخلايا بالوسط حتى تتشكل المستعمرات. إذا كان المركب محل الاهتمام مثبطا للورم ، فسوف يثبط نمو الخلايا مما يؤدي إلى عدد قليل من المستعمرات في الآبار. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء اختبار تكوين مستعمرة أجار ناعمة لدراسة تأثير مثبطات PADI على أورام خلايا سرطان الثدي.

ابدأ هذا الإجراء بتحضير 3٪ 2-hydroxyethyl agarose. في زجاجة زجاجية نظيفة وجافة سعة 100 مل ، أضف 0.9 جرام من 2-هيدروكسي إيثيل أغاروز متبوعا ب 30 مل من الماء المقطر. يسكب المزيج في الميكروويف لمدة 15 ثانية ويحرك برفق. كرر هذه الخطوة حتى