حقن وريد الذيل: طريقة لإدارة الخلايا السرطانية للدراسات النقيلية في نموذج الفأر

ابدأ بإضافة التربسين إلى طبق بتري يحتوي على خلايا سرطان الثدي المصنفة لفصلها عن السطح. أضف وسيطا يحتوي على مصل لإيقاف عمل التربسين. انقل تعليق الخلية إلى أنبوب مخروطي الشكل وقم بطرده المركزي إلى خلية الحبيبات.

تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا في محلول ملحي مخزن بالفوسفات. ضع الأنبوب على الجليد لإبطاء عملية التمثيل الغذائي للخلايا. قم بتحميل تعليق الخلية هذا الذي يحتوي على الكمية المطلوبة من الخلايا في حقنة قفل Luer وقم بتثبيت إبرة عليه.

ضع الفأر في مصفاة القوارض مع ذيله بالخارج. اغمس الذيل في ماء دافئ لتوسيع الأوردة. يوجد وريدان على الجانبين الجانبيين وشرايان على الجانب البطني من الذيل. امسح الذيل بالكحول ، وأدخل الإبرة ، وحقن معلق الخلية.

بمجرد دخولها إلى مجرى الدم ، تغزو الخلايا السرطانية المحقونة الأعضاء ، مثل الرئتين ، وتتكاثر. قم بإزالة الإبرة ببطء واستخدم شاشا معقما في موقع الحقن للضغط لوقف النزيف. أعد الماوس إلى قفصه وتأكد من الشفاء التام. في البروتوكول التالي ، نوضح حقن الخلايا السرطانية النقيلية المسماة في نموذج الفأر لتحديد ورم خبيث لسرطان الثدي واستعماره.

استنشق الوسائط واشطف ألواح الخلايا باستخدام 1X PBS. قم بتربسين الخلايا ب 5 ملليلتر من التربسين لكل صفيحة طولها 15 سم لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق وانقل جميع الخلايا إلى أنبوب مخروطي الشكل. اغسل الخلايا المتبقية من طبق زراعة الأنسجة بوسائط نمو كاملة كافية لإرواء التربسين. أضف الغسيل إلى نفس الأنبوب المخروطي. عد الخلايا باستخدام عداد الخلايا الآلي لتحديد العدد الإجمالي للخلية.

بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للخلايا عند 122 مرة G لمدة ثلاث دقائق وشفط المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في 1X PBS بالتركيز المطلوب. هنا ، يتم حقن 25,000 خلية في كل فأر في 100 ميكرولتر من PBS ، وبالتالي فإن الخلايا المعلقة تبلغ 250,000 خلية لكل ملليلتر. احتفظ بتعليق الخلية على الجليد حتى الحقن.

العمل في غطاء في منشأة ، قم بخلط الخلايا برفق ولكن جيدا عن طريق قلب الأنبوب أو استخدام حقنة سعة 1 مليلتر لضمان إعادة تعليقها بشكل موحد. الآن ، قم بتحميل حقنة قفل Luer سعة 1 مليلتر مع تعليق الخلية وطرد فقاعات الهواء الزائدة. ضع إبرة 1/2 بوصة قياس 30 على المحقنة مع شطبة لأعلى وطرد فقاعات الهواء.

ضع الماوس برفق في مصفاة القوارض. يجب أن يكون وريد الذيل الجانبي مرئيا ومتسعا. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فقم بقرص قاعدة الذيل برفق واغمس الذيل في ماء الصنبور الدافئ لتوسيع الأوردة. استخدم مناديل كحولية لتنظيف الذيل. ثم أدخل الإبرة في وريد الذيل ، مع الجانب المائل لأعلى ، وحقن 100 ميكرولتر من تعليق الخلية. إذا تم إدخال الإبرة بشكل صحيح في الوريد ، فيجب أن تنزلق بسهولة إلى الأمام والخلف قليلا ، ويجب ألا تكون هناك مقاومة عند دفع المكبس.

يجب أن تؤدي الحقن الناجحة أيضا إلى تدفق ، حيث يتحول اللون الأزرق للوريد إلى اللون الأبيض لبضع ثوان بعد الحقن. قم بإزالة الإبرة ببطء ، وباستخدام شاش معقم ، اضغط على موقع الحقن لوقف أي نزيف. أعد الماوس إلى قفصه ومراقبه لمدة 15 دقيقة لضمان الشفاء التام.