اختبار التألق المناعي CTC: تقنية لتوصيف الخلايا السرطانية المنتشرة
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:05 دقيقة • April 30th, 2023
- للبدء ، قم بتخفيف الخلايا السرطانية المعزولة أو الخلايا السرطانية إلى التركيز المطلوب باستخدام محلول مضاد للارتباط يحمي الخلايا من قص السوائل وتلف الضغط. بعد ذلك ، قم بتجميع شريحة مجهر مطلية بالبولي يسين وبطاقة مرشح الطرد المركزي الخلوي في مجموعة قمع الطرد المركزي الخلوي. انقل تعليق الخلية إلى منفذ القمع للتجميع متبوعا بالطرد المركزي الخلوي.
تركزقوة الطرد المركزي وتودع طبقة أحادية من الخلايا على منطقة دائرية على الشريحة. اعزل المنطقة المترسبة بالخلايا باستخدام عازل السيليكون. بمجرد أن تجف ، قم بإصلاح الخلايا باستخدام بارافورمالدهايد. بعد ذلك ، احتضان الخلايا بمحلول مانع مناسب يحتوي على بروتينات ترتبط بسهولة بأي مواقع ربط غير محددة على سطح الخلية.
الآن ، قم بتسمية الخلايا بمحلول جسم مضاد يحمل علامة الفلورسنت ذي الأهمية. تتعرف الأجسام المضادة الموسومة بالفلوروفور على جزيئات مستهدفة محددة على سطح الخلية وترتبط بها. اغسل العينة لإزالة أي أجسام مضادة غير مرتبطة. أضف محلول تركيب لإعداد العينة للتصوير.
استخدم مجهر مضان للكشف عن الضوء المنبعث من اقترانات الأجسام المضادة والفلوروفور المرتبطة بالمستضدات المستهدفة على الخلايا السرطانية. في هذا البروتوكول ، سنقوم بإجراء فحص التألق المناعي ل CTCs في عينات مرضى سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة.
- لتلوين التألق المناعي ، قم بحساب الخلايا في
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية