موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:45 دقيقة • April 30th, 2023
- أولا ، قم بإذابة قوارير مصفوفة الغشاء القاعدي عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها. تتكون مصفوفة الغشاء القاعدي من بروتينات موجودة في البيئة المكروية للورم تساعد في الحفاظ على خصائص الخلايا السرطانية في المختبر. في اليوم التالي ، ضع قارورة مصفوفة الغشاء القاعدي على الجليد للاحتفاظ بالمصفوفة في الحالة السائلة. خذ خلايا سرطان الرئة إلى أنبوب طرد مركزي مبرد مسبقا وجهاز طرد مركزي عند 4 درجات مئوية. استنشق المادة الطافية واضغط برفق لإخراج الحبيبات ووضعها على الجليد. بعد ذلك ، أضف حجما مناسبا من مزيج الغشاء القاعدي في هذا الأنبوب واخلطه لعمل تعليق خلوي موحد. قم بتنفيذ جميع الخطوات عند درجة حرارة منخفضة لمنع الغشاء القاعدي من التبلور.
انقل حجما مناسبا من تعليق مصفوفة الخلية إلى وسط كل بئر في صفيحة بئر مبردة مسبقا ، تغطي البئر بأكمله. احتضان لوحة البئر حتى تصلب المصفوفة. افحص تحت المجهر لضمان التوزيع المتساوي للخلايا داخل المصفوفة. أضف ثقافة ثلاثية الأبعاد وسيطا كاملا في كل بئر واحتضانه عند 37 درجة مئوية. يسهل هذا الوسيط تفاعلات مصفوفة الخلية. وبالتالي ، تشكل الخلايا عضيات ذات هياكل تشبه الأسينار. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء ثقافة ثلاثية الأبعاد لخلايا سرطان الرئة TUM622.
للبدء ، قم بإذابة قوارير مصفوفة الغشاء القاعدي في ثلاجة 4 درجات مئوية طوال الليل. قم بتبريد ماصتين وأطرافهما بلا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية