الزراعة المشتركة ثلاثية الأبعاد لخلايا سرطان الرئة مع CAFs: نظام نموذج في المختبر لدراسة تطور الورم

- في الثقافات المشتركة ثلاثية الأبعاد ، تزرع أنواع متعددة من الخلايا معا في مصفوفات مثل مصفوفة الغشاء القاعدي ، والتي تحاكي البيئة المكروية الطبيعية للمصفوفة خارج الخلية ، مما يسهل تفاعلات الخلية والخلية والمصفوفة. لإنشاء ثقافة مشتركة ثلاثية الأبعاد مدمجة ، قم بإعداد تعليق موحد للأرومات الليفية المرتبطة بالسرطان أو CAFs وخلايا سرطان الرئة المأخوذة في قسمين بنسبة واحدة ، في مصفوفة الغشاء القاعدي. حافظ على التعليق على الجليد لمنع تصلب المصفوفة في درجات الحرارة المحيطة.

انقل حجما مناسبا من التعليق إلى لوحة زراعة الخلايا. احتضان عند 37 درجة مئوية للمدة المطلوبة لتضمين الخلايا في المصفوفة. لإنشاء ثقافة مشتركة ثلاثية الأبعاد متراكبة ، قم بإعداد تعليق لخلايا سرطان الرئة في مصفوفة الغشاء القاعدي ، بكثافة الخلية المطلوبة. حافظ على التعليق على الجليد. الماصة حجم مناسب من تعليق مصفوفة الخلية هذا في لوحة زراعة الخلية. احتضان عند 37 درجة مئوية لإعداد الزراعة الأحادية للخلايا السرطانية المدمجة.

بعد ذلك ، قم بنقل الحجم المطلوب من CAFs المعلقة في وسائط الثقافة المفضلة ، فوق الخلايا السرطانية المدمجة. في الثقافات المشتركة ثلاثية الأبعاد ، تعزز CAFs تكوين الخلايا الكروية للخلايا السرطانية وتجذب الخلايا السرطانية ، مما يؤدي إلى هياكل تشبه الدموع. في هذا البروتوكول ، سنقوم بالزراعة المشتركة لخلايا سرطان الرئة TUM622 و CAFs لدراسة تفاعلها.

- بعد تحضير معلقات الخلايا ل TUM622 و CAFs ، كما هو موضح سابقا ، احسب كثافة خلايا CAF عن طريق خلط 10 ميكرولتر من معلق الخلية مع 10 ميكرولتر من التريبان الأزرق. أضف 10 ميكرولترات من الخليط إلى كل غرفة من الغرفتين على مقياس كثافة الدم لحساب وحساب كثافة الخلية. لتضمين خلايا TUM622 و CAFs في مصفوفة الغشاء القاعدي ، احسب أولا العدد المطلوب من الخلايا المستخدمة في الطلاء ، بناء على معلومات كثافة الخلية. يتم زرع CAFs بنسبة 2 إلى 1 من خلايا TUM622. انقل الحجم المحسوب ل TUM622 ، بالإضافة إلى تعليق خلايا CAF ، إلى نفس أنبوب الطرد المركزي. تدور لأسفل واستنشق كل متوسطة. أعد تعليقها في مصفوفة غشاء القاعدة ولوحة 310 ميكرولتر من الخليط في كل بئر من صفيحة 24 بئر. بالنسبة للتألق المناعي ، انقل 60 ميكرولترا من مخاليط TUM622 و CAF إلى شرائح الغرفة كما هو موضح سابقا.

للزراعة المشتركة ل TUM622 مع CAFs المتراكبة في مصفوفة الغشاء القاعدي ، قم أولا بإعداد الزراعة الأحادية TUM622 كما هو موضح سابقا. انقل ضعف عدد معلقات CAF إلى أنبوب طرد مركزي وقم بالدوران عند 300 مرة "جم" لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. استنشق المادة الطافية وأعد تعليق CAFs في مليلتر واحد من وسط الثقافة ثلاثية الأبعاد. انقل معلق CAF سعة مليلتر واحد إلى البئر الذي يحتوي على خلايا TUM622 المضمنة.