تصاعد الجرعة: طريقة لتطوير مقاومة الأدوية في الخلايا السرطانية
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:17 دقيقة • April 30th, 2023
- مثبطات التيروزين كيناز ، TKI ، تمنع مستقبلات كيناز من الارتباط ب ATP ، مما يمنع الفسفرة. ابدأ بطلاء الخلايا السرطانية في وسط النمو. اسمح لهم بالوصول إلى كثافة مواتية ، ونقل الخلايا إلى آبار متعددة. بعد النمو بين عشية وضحاها ، قم بتوزيع تركيزات مختلفة من الأدوية في آبار متعددة واترك الخلايا تنمو للمدة المطلوبة. أضف MTT ، وهي صبغة قابلة للذوبان في الماء ، لقياس صلاحية الخلية. تقوم إنزيمات الميتوكوندريا بتحويل MTT إلى فورمازان أرجواني غير قابل للذوبان داخل الخلايا الحية.
أوقف التفاعل عن طريق إضافة عامل مذاب مناسب وقياس الفورمازان الطيفي الضوئي. تسمى هذه الطريقة مقايسة MTT. ارسم رسما بيانيا للخلايا الحية المشار إليها بواسطة الفورمازان مقابل تركيزات الأدوية. احسب التركيز المثبط ، IC50 ، من خلال إيجاد تركيز الدواء الذي يقتل 50٪ من الخلايا باستخدام البرنامج.
بعد ذلك ، قم بزراعة الخلايا السرطانية في وسط النمو وتوزيعها في ثلاث لوحات مختلفة. بعد أن تصل الخلايا إلى التقاء فرعي ، أضف 1/10 تخفيف تركيز IC50. اسمح للخلايا بالنمو وإجراء اختبار MTT. كرر هذه العملية مع زيادة جرعة الدواء. تطور الخلايا السرطانية ببطء مقاومة ل TKIs بسبب الطفرات في تسلسل البروتين.
يوضح البروتوكول التالي تطور مقاومة الأفاتينيب في خلايا PC9 عن طريق تصعيد الجرعة.
- لتحديد تركيز مقاومة الأفاتينيب المناسب ، قم بزراعة خلايا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية