تحليل دورة الخلية: نهج لدراسة تنظيم دورة الخلية لخلايا سرطان الرئة المنقولة بواسطة miRNA

0 مشاهدات3:34 د • April 30th, 2023

- الحمض النووي الريبي الصغير أو الحمض النووي الريبي هو حمض نوبي صغير غير مشفر. بعد تعداء الحمض النووي الريبي المرسال أو إدخاله في الخلية ، فإنه يشكل مركب بروتين miRNA. يستهدف المركب ويرتبط ب mRNA معين وينظم تعبيره سلبا ، مما يوقف تقدم دورة الخلية.

لبدء التحليل ، أضف مثبتا مناسبا للتجفيف إلى مزرعة محصودة لخلايا سرطان الرئة المنقولة بواسطة miRNA. يحافظ المثبت على الخلايا ويخلل أيضا غشاء الخلية. عالج الخلايا بمزيج من يوديد البروبيديوم ، وصبغة الحمض النووي الفلورية ، وإنزيم الريبونوكلياز.

تدخل

الصبغة إلى الخلايا وتلطخ كل من الحمض النووي والحمض النووي الريبي. تعمل الإنزيمات على تحلل الحمض النووي الريبي على وجه التحديد مما يسمح بقياس الحمض النووي الأمثل. استخدم مقياس التدفق الخلوي لتحديد نسبة الخلايا المتوقفة في مراحل دورة الخلية المختلفة بناء على شدة مضان الخلايا الفردية.

تحتوي الخلايا في مرحلتي الراحة والنمو على محتوى أقل من الحمض النووي وبالتالي انخفاض كثافة التألق. تنتج الخلايا في مرحلة الفجوة 2 مع ضعف كمية الحمض النووي ضعف شدة التألق. تحفز الخلايا في مرحلة تخليق الحمض النووي قيمة مضان بين المجموعتين الأخريين. سيقوم البروتوكول التالي بتحليل تنظيم دورة الخلية لخلايا سرطان الرئة المعالجة بالميرنا عن طريق قياس محتوى الحمض النووي الخاص بها باستخدام تلطيخ PI وقياس التدفق الخلوي.

- قم بنقل الخلايا كما هو موضح في القسم السابق من هذا الفيديو. حصاد الخلايا من كل عينة في أنابيب معقمة منفصلة سعة 15 مليلتر عن طريق التربسين. بعد ذلك ، اغسل الخلايا مرتين باستخدام 1X PBS عن طريق الطرد المركزي عند 751 جم لمدة 5 دقائق ثم قم بإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الحبيبات وكسرها عن طريق إضافة 200 ميكرولتر من الثلج 1X PBS من خلال سحب العينات.

أضف 2 مل من 70٪ من الإيثانول المثلج بالتنقيط إلى الأنبوب أثناء دوامة الأنبوب برفق لإصلاح الخلايا. احتضان الأنابيب لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وضعها في 4 درجات مئوية لمدة 1 ساعة. قم بإزالة الأنابيب من 4 درجات مئوية وأجهزة الطرد المركزي.

أضف 2 مل من PBS المثلج والدوامة ثم قم بإزالة المادة الطافية عن طريق الطرد المركزي. أضف 500 ميكرولتر من 1X PBS يحتوي على يوديد البروبيديوم والريبونوكلياز A بتركيزات 50 و 200 ميكروغرام لكل مليلتر ، على التوالي ، في كل عينة واحتضانها لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. نقل العينات إلى أنابيب مناسبة للحماية من الضوء وتشغيلها على مقياس التدفق الخلوي.

08:52

تتبع الزمني للتقدم دورة الخلية باستخدام التدفق الخلوي دون الحاجة إلى مزامنة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:44

تحليل يستند الخلوي-Imaging- وتدفق الوظيفة خلية ودورة الخلية في 3D الميلانوما الأجسام الشبه الكروية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:02

دراسة الخلية التعبير عن تنظيم دورة الجينات من قبل اثنين من بروتوكولات التزامن الخلية التكميلية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:19

تحليل المركز دورة الخلية في خلايا الثدييات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:38

فحص استخراج الحمض النووي الريبي: طريقة لاستخراج الحمض النووي الريبي من خلايا سرطان الرئة المنقولة miRNA

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:02

المصفوفة الدقيقة للأجسام المضادة: تقنية لدراسة التعبير البروتيني لخلايا سرطان الرئة المعالجة بالميرنا المرسال

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

16:24

التنميط من MicroRNAs الاستروجين التنظيم في خلايا سرطان الثدي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:01

تحليل إكلينيكية من ميرنا التعبير في سرطان الثدي الأنسجة باستخدام ميرنا

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:00

من خلال المرآة: المجهري الوقت الفاصل بين وتتبع طولية من الخلايا واحدة لدراسة العلاج المضادة للسرطان

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:44

تحليل ميرنا اندماجي علاجات لتنظيم دورة الخلية والأوعية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 29 أغسطس 2026