JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 3:34 د • April 30th, 2023
- الحمض النووي الريبي الصغير أو الحمض النووي الريبي هو حمض نوبي صغير غير مشفر. بعد تعداء الحمض النووي الريبي المرسال أو إدخاله في الخلية ، فإنه يشكل مركب بروتين miRNA. يستهدف المركب ويرتبط ب mRNA معين وينظم تعبيره سلبا ، مما يوقف تقدم دورة الخلية.
لبدء التحليل ، أضف مثبتا مناسبا للتجفيف إلى مزرعة محصودة لخلايا سرطان الرئة المنقولة بواسطة miRNA. يحافظ المثبت على الخلايا ويخلل أيضا غشاء الخلية. عالج الخلايا بمزيج من يوديد البروبيديوم ، وصبغة الحمض النووي الفلورية ، وإنزيم الريبونوكلياز.
تدخلالصبغة إلى الخلايا وتلطخ كل من الحمض النووي والحمض النووي الريبي. تعمل الإنزيمات على تحلل الحمض النووي الريبي على وجه التحديد مما يسمح بقياس الحمض النووي الأمثل. استخدم مقياس التدفق الخلوي لتحديد نسبة الخلايا المتوقفة في مراحل دورة الخلية المختلفة بناء على شدة مضان الخلايا الفردية.
تحتوي الخلايا في مرحلتي الراحة والنمو على محتوى أقل من الحمض النووي وبالتالي انخفاض كثافة التألق. تنتج الخلايا في مرحلة الفجوة 2 مع ضعف كمية الحمض النووي ضعف شدة التألق. تحفز الخلايا في مرحلة تخليق الحمض النووي قيمة مضان بين المجموعتين الأخريين. سيقوم البروتوكول التالي بتحليل تنظيم دورة الخلية لخلايا سرطان الرئة المعالجة بالميرنا عن طريق قياس محتوى الحمض النووي الخاص بها باستخدام تلطيخ PI وقياس التدفق الخلوي.
- قم بنقل الخلايا كما هو موضح في القسم السابق من هذا الفيديو. حصاد الخلايا من كل عينة في أنابيب معقمة منفصلة سعة 15 مليلتر عن طريق التربسين. بعد ذلك ، اغسل الخلايا مرتين باستخدام 1X PBS عن طريق الطرد المركزي عند 751 جم لمدة 5 دقائق ثم قم بإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الحبيبات وكسرها عن طريق إضافة 200 ميكرولتر من الثلج 1X PBS من خلال سحب العينات.
أضف 2 مل من 70٪ من الإيثانول المثلج بالتنقيط إلى الأنبوب أثناء دوامة الأنبوب برفق لإصلاح الخلايا. احتضان الأنابيب لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وضعها في 4 درجات مئوية لمدة 1 ساعة. قم بإزالة الأنابيب من 4 درجات مئوية وأجهزة الطرد المركزي.
أضف 2 مل من PBS المثلج والدوامة ثم قم بإزالة المادة الطافية عن طريق الطرد المركزي. أضف 500 ميكرولتر من 1X PBS يحتوي على يوديد البروبيديوم والريبونوكلياز A بتركيزات 50 و 200 ميكروغرام لكل مليلتر ، على التوالي ، في كل عينة واحتضانها لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. نقل العينات إلى أنابيب مناسبة للحماية من الضوء وتشغيلها على مقياس التدفق الخلوي.
تبحث هذه الدراسة في دور الحمض الريبوزي النووي الميكروي (miRNA) في تنظيم الدورة الخلوية لخلايا سرطان الرئة. وتهدف الدراسة، من خلال استخدام قياس التدفق الخلوي وصبغة يوديد البروبيديوم، إلى قياس محتوى DNA وتحليل مراحل الدورة الخلوية في الخلايا المعالجة بـ miRNA.
يتيح التحليل الكمي لدورة الخلية في خلايا سرطان الرئة المنقولة بـ miRNA استقصاءً دقيقاً لآليات تنظيم دورة الخلية ذات الصلة باكتشاف أدوية الأورام. ويوفر قياس محتوى DNA القائم على قياس التدفق الخلوي بيانات قابلة للتنفيذ للتحقق من الأهداف والحد من المخاطر الميكانيكية في البرامج العلاجية في مراحلها المبكرة. ويدعم هذا النهج الثقة التنبؤية عند نقاط التحول الرئيسية في مسار البحث والتطوير الخاص بعلم الأورام.
يتكامل تحليل الدورة الخلوية القائم على قياس التدفق الخلوي هذا ضمن التسلسل الممتد من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة ما قبل السريرية، مما يدعم كلاً من التحقق من صحة الهدف وتحديد المركبات الرائدة في أبحاث علم الأورام.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026