تحليل دورة الخلية: نهج لدراسة تنظيم دورة الخلية لخلايا سرطان الرئة المنقولة بواسطة miRNA
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:34 دقيقة • April 30th, 2023
- الحمض النووي الريبي الصغير أو الحمض النووي الريبي هو حمض نوبي صغير غير مشفر. بعد تعداء الحمض النووي الريبي المرسال أو إدخاله في الخلية ، فإنه يشكل مركب بروتين miRNA. يستهدف المركب ويرتبط ب mRNA معين وينظم تعبيره سلبا ، مما يوقف تقدم دورة الخلية.
لبدء التحليل ، أضف مثبتا مناسبا للتجفيف إلى مزرعة محصودة لخلايا سرطان الرئة المنقولة بواسطة miRNA. يحافظ المثبت على الخلايا ويخلل أيضا غشاء الخلية. عالج الخلايا بمزيج من يوديد البروبيديوم ، وصبغة الحمض النووي الفلورية ، وإنزيم الريبونوكلياز.
تدخلالصبغة إلى الخلايا وتلطخ كل من الحمض النووي والحمض النووي الريبي. تعمل الإنزيمات على تحلل الحمض النووي الريبي على وجه التحديد مما يسمح بقياس الحمض النووي الأمثل. استخدم مقياس التدفق الخلوي لتحديد نسبة الخلايا المتوقفة في مراحل دورة الخلية المختلفة بناء على شدة مضان الخلايا الفردية.
تحتوي الخلايا في مرحلتي الراحة والنمو على محتوى أقل من الحمض النووي وبالتالي انخفاض كثافة التألق. تنتج الخلايا في مرحلة الفجوة 2 مع ضعف كمية الحمض النووي ضعف شدة التألق. تحفز الخلايا في مرحلة تخليق الحمض النووي قيمة مضان بين المجموعتين الأخريين. سيقوم البروتوكول التالي بتحليل تنظيم دورة الخلية لخلايا سرطان الرئة المعالجة بالميرنا عن طريق قياس محتوى الحمض النووي الخاص بها باستخدام تلطيخ PI وقياس التدفق الخلوي.
- قم بنقل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية