موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:02 دقيقة • April 30th, 2023
- ابدأ بإضافة محلول البيوتين ومخزن مؤقت لوضع العلامات على عينة البروتين. احتضان لتسهيل ارتباط البيوتين بالبروتينات. أضف كاشف توقف ودوامة. بعد ذلك ، ضع شريحة مصفوفة دقيقة للأجسام المضادة في طبق يحتوي على كاشف مانع لمنع الارتباط غير المحدد للأجسام المضادة. اغسل الشريحة بالماء المقطر المزدوج لإزالة محلول الحظر. ضع شريحة المصفوفة الدقيقة في حجرة. امزج عينة البروتين الحيوي مع محلول اقتران وأضفه إلى الشريحة لتسهيل ارتباط البروتينات المستهدفة بالأجسام المضادة المقابلة لها. انقل الشريحة إلى طبق يحتوي على مخزن مؤقت للغسيل واستبدل المخزن المؤقت بالماء المقطر المزدوج. بعد ذلك ، ضع الشريحة في مخزن مؤقت للكشف يحتوي على ستربتافيدين المسمى بالفلورسنت لتعزيز ارتباطه بالبروتينات الحيوية.
احتضن الطبق في الظلام للحفاظ على شدة التألق. قم بإزالة الشريحة وضعها في ماسح ضوئي للمصفوفات الدقيقة. يبحث الماسح الضوئي عن إشارات الفلورسنت من الستربتافيدين المرتبط بالبروتين المستهدف. بناء على شدة التألق ، يحلل البرنامج مدى تعبير البروتين. في البروتوكول التالي ، نقوم بإجراء مصفوفة دقيقة للأجسام المضادة لتحليل التغيرات في التعبير الجيني المرتبطة بدورة الخلية.
- تهدف هذه التجربة إلى تحديد جميع تغير تعبير بروتينات مسار دورة الخلية عن طريق علاج الحمض النووي الريبي الصغير. اجمع عينات البروتين وفقا للإجراء الموضح في قسم التعدي وحدد كميا باستخدام مقايسة BCA. قم بإزالة الشرائح من 4 درجات مئوية تحت الصفر قبل ساعة واحدة من التجربة لإحضارها إلى درجة حرارة الغرفة وإزالة الرطوبة. خذ 70 ميكروغراما من عينات البروتين وقم بإعداد شرائح العينة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة ، والتي يتم وصفها أيضا خطوة بخطوة في قسم النص.
هنا تجدر الإشارة إلى أن الغسيل المناسب للشرائح بالماء منزوع الأيونات فائق النقاء هو خطوة مهمة أخرى لأن هذا سيساعد على تقليل خلفية الشرائح. بالإضافة إلى ذلك ، من الأهمية بمكان في هذه التجربة عدم تجفيف شرائح العينة حتى الخطوة النهائية. أخيرا ، امسح الشريحة ضوئيا باستخدام آلة المصفوفة الدقيقة وقم بتحليل البيانات.