تحضير رئة الفأر لقياس التدفق الخلوي: توليد تعليق الخلية من أنسجة الرئة لتحليل قياس التدفق الخلوي

- ابدأ بأخذ فأر قتل رحيم وقم بتثبيته على لوحة تشريح بشريط مختبر. استخدم المقص لقطع الجلد. قم بعمل شق عمودي عبر الحجاب الحاجز وقطع الأضلاع للوصول إلى التجويف الصدري الذي يعرض القلب والرئتين. بعد ذلك ، قم بعمل شق صغير في البطين الأيسر للقلب. بعد ذلك ، حدد موقع البطين الأيمن وأدخل حقنة تحتوي على PBS في تجويف البطين. قم بنشر PBS من خلال البطين الأيمن للسماح للدم بالتدفق من الشق المعد مسبقا في البطين الأيسر حتى تتحول الرئتان إلى اللون الأبيض. أخرج أنسجة الرئة التي تحتوي على عقيدات الورم وفرم إلى قطع صغيرة.

احتضان القطع في المخزن المؤقت لهضم الرئة. يساعد الكولاجيناز الموجود في المخزن المؤقت لهضم الرئة على عزل الخلايا ، ويساعد الحمض النووي على التخلص من الحمض النووي من الخلايا الميتة. قم بتصفية التعليق الناتج من خلال مصفاة خلية لإزالة الكتل وجعل تعليق الخلية موحدا. جهاز طرد مركزي وإعادة تعليق الحبيبات في محلول كلوريد الأمونيوم للبوتاسيوم لتحلل كريات الدم الحمراء المتبقية. جهاز طرد مركزي لجمع كرات الدم البيضاء والخلايا السرطانية في الحبيبات. أعد تعليق الحبيبات في PBS المكملة ب FCS ، للحفاظ على استقرار الخلية. في البروتوكول التالي ، سنوضح تحضير تعليق خلايا الرئة لتحليل قياس التدفق الخلوي.

بعد نقطة النهاية التجريبية المناسبة ، انقع الذبيحة في 70٪ من الإيثانول وقم بتأمين في لوحة التشريح. قم ب