JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 3:39 د • April 30th, 2023
- للبدء ، احصل على عينات من ورم الرئة كعينات من الأنسجة أو كعينات من علم الخلايا من غسول الشعب الهوائية - غسل محلول ملحي يحتوي على خلايا من داخل الشعب الهوائية. لتحضير عينات من الأنسجة، انقل أنسجة الرئة التي تم تشريحها حديثا إلى شريط التضمين. إصلاح والحفاظ على الأنسجة بالتركيز المناسب من الفورمالين.
لتحضير عينات علم الخلايا ، أولا ، قم بمعالجة غسول الشعب الهوائية باستخدام DL-dithiothreitol للتجانس. جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية. بعد ذلك ، عالج بمحلول حال للبلغم لتسييل المخاط وفصل الخلايا. جهاز طرد مركزي لتكوير الخلايا وإصلاحها بالفورمالين. عالج الخلايا بكاشف تحضير كتلة خلية مناسب لتركيز العينة أثناء العمل بأحجام حبيبات صغيرة.
انقل الحبيبات إلى كاسيت تضمين. قم بمعالجة كلا النوعين من العينات عن طريق تجفيفهما من خلال سلسلة من حمامات الكحول المتدرجة. قم بإزالة الكحول باستخدام عامل مقاصة مناسب متبوعا بتسلل الشمع. قم بتضمين الكاسيت في شمع البارافين السائل واتركه يتصلب. يشكل هذا طبقة حول الأنسجة ، وتثبت العينة في مكانها.
استخدم ميكروتوم للحصول على أقسام مقطعة إلى شرائح رفيعة. ضع الأقسام على شرائح زجاجية موجبة الشحنة لتسهيل الالتصاق. يجف ويترك لملاحظة الشرائح تحت المجهر. في البروتوكول التالي ، نوضح تقنيات تحضير العينات من أنسجة ورم الرئة وعينات علم الخلايا.
للبدء ، قم بتثبيت أنسجة الورم في الفورمالين المحايد 10٪ في كاسيت وقم بتضمين الكاسيت في البارافين كما هو موضح في بروتوكول النص. قم بتضمين الأنسجة المتسللة داخل قالب مملوء بالبارافين المنصهر. دع الأنسجة تبقى في القالب حتى يتجمد البارافين. بعد ذلك ، استخدم ميكروتوما لتقسيم أنسجة البارافين المضمنة بسمك ثلاثة ميكرومترات.
انقل شريط البارافين إلى شريحة مجهر زجاجي موجب الشحنة. ثم جفف الشريحة لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. أولا ، اجمع غسلات الشعب الهوائية في محلول حافظ. انقل الغسالات إلى أنبوب مخروطي سعة 50 مل. أضف جرامين من DL-dithiothreitol وقم بتدوير الأنبوب لمدة 30 دقيقة. ثم جهاز الطرد المركزي عند 250 مرة جم لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.
قم بإزالة المادة الطافية وأضف 10 مل من محلول حال للبلغم. رج العينة بسرعة متوسطة لمدة 20 دقيقة ، وجهاز الطرد المركزي عند 250 مرة جم لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، قم بإزالة المادة الطافية وقم بإيداع حبيبات الخلية في أنبوب تجميع يحتوي على 10٪ فورمالين محايد.
أضف أربع قطرات من عامل تحضير كتلة الخلية. انقل حبيبات الخلية إلى كاسيت. قم بإصلاح حبيبات الخلية لتضمين البارافين وتقسيمها باستخدام العملية الموضحة سابقا لإعداد عينات أنسجة الورم.
توضح هذه المقالة تقنيات تحضير عينات أورام الرئة وعينات الخلايا. وتفصل العمليات المتبعة في تثبيت هذه العينات وطمرها وتقطيعها للفحص المجهري.
يتيح هذا البروتوكول حفظ عينات الأنسجة والخلايا لسرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC) بشكل موثوق، مما يدعم تحليلات المؤشرات الحيوية اللاحقة مثل الكيمياء النسيجية المناعية لـ PD-L1. تضمن عملية التثبيت القياسية بالفورمالين والطمر في البارافين سلامة العينات للتقييم الهيستوباثولوجي، وهو أمر بالغ الأهمية للتحقق من الأهداف في تطوير أدوية الأورام المناعية. كما تسهل هذه الطريقة عملية التقطيع والتصبيغ المتسقة، مما يتيح تقييماً مجهرياً قابلاً للتكرار عبر مسارات العمل الخاصة بالاكتشاف والدراسات قبل السريرية.
تدمج هذه الطريقة في مسارات اكتشاف سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC) من خلال تمكين التأكيد النسيجي المرضي للتعبير عن الهدف قبل إجراء المقاييس الوظيفية.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 22 أغسطس 2026