مقايسة تكوين المستعمرة: تقييم فعالية العوامل المضادة للسرطان على خلايا سرطان الرئة المكونة للمستعمرات

- مقايسة تكوين المستعمرة عبارة عن تحليل في المختبر لدواء مضاد للسرطان على نمو الخلية السرطانية ، وتكاثرها وتمايزها إلى مستعمرات في وسط شبه صلب. للبدء ، قم بزراعة الخلايا السرطانية في وسط RPMI مع مكمل النمو - مصل الأبقار الجنيني ، أو FBS ، والمضادات الحيوية. احتضان الخلايا للمدة المطلوبة.

بعد ذلك ، اجمع التركيز المطلوب للخلايا في أنبوب الطرد الصغير وجهاز الطرد المركزي. أعد تعليق الحبيبات في PBS. قم بإعداد وسط قائم على ميثيل السليلوز ، وقم بتوزيعه على أنابيب مختلفة باستخدام FBS لتعزيز النمو الأمثل.

أضف كمية مناسبة من تعليق الخلية في الأنابيب ، وقم بدوامها لخلط الخلايا مع الوسط. بعد ذلك ، أضف مركبات مضادة للسرطان في الأنابيب ، وقم بإعداد عنصر تحكم عن طريق إضافة DMSO. أنابيب دوامة.

أضف خليط الخلية هذا إلى لوحة الثقافة ، واحتضنه للمدة المطلوبة. بعد الحضانة ، أضف ميثيل ثيازول ديفينيل تيرازوليوم بروميد ، أو MTT ، واحتضنه لبعض الوقت. يقلل MTT من ملح التيترازوليوم الأصفر في الخلايا القابلة للحياة إلى بلورات فورمازان الأرجواني. تتحول المستعمرات القابلة للحياة إلى اللون البنفسجي. التقط الصور باستخدام كاميرا رقمية ، وحلل المستعمرات القابلة للحياة. في البروتوكول التالي ، سوف ندرس مقايسة تكوين المستعمرة لتقييم نشاط محاكات هيدروكسي كومارين OT48 و BH3 في سرطان الرئة.

- للبدء ، قم بلوحة 20,000 خلية