JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 4:32 د • April 30th, 2023
- خذ سلكا وظيفيا يحتوي على جزء ذهبي صغير مغطى بهيدروجيل مقترن بالأجسام المضادة ذات الأهمية. اغمس الجزء الذهبي من السلك في قارورة تحتوي على خلايا سرطانية. أغلقه بسدادة سلكية ، واحتضنه في دوار أنبوبي. ترتبط الخلايا السرطانية المنتشرة أو CTCs التي تعرض مستضدات سطحية بالأجسام المضادة الموجودة على السلك. اشطف السلك عن طريق غمسه في قوارير تحتوي على محلول ملحي مخزن بالفوسفات أو PBS وجففها في الهواء. الآن قم بغمس السلك في محلول الأسيتون لإصلاح الخلايا عن طريق تجفيفها.
بعد ذلك ، أدخل السلك برفق من خلال طرف P200 مع الجزء الوظيفي بداخله. املأ الشريط بجسم مضاد مترافق مع فلوروكروم لغمر السلك. ترتبط هذه الأجسام المضادة المسماة بالمستضدات الخاصة بها الموجودة في الخلايا. أغلق الفتحة بغشاء مختبري واحتضنه طوال الليل في الظلام عند 4 درجات مئوية. بعد ذلك ، اغسل السلك باستخدام PBS لإزالة أي أجسام مضادة غير مرتبطة. ضع السلك في حامل سلك واعرضه تحت المجهر الفلوري. تتألق الخلايا السرطانية السرطانية المرتبطة بالأجسام المضادة على السلك. في البروتوكول التالي ، سنلتقط CTCs على سلك طبي ونتعرف عليها عن طريق تلطيخ الفلورسنت المناعي.
- لبدء التجربة ، أعد تعليق محتويات قارورة T75 بالكامل عند التقاء 80٪ في قارورة سعة 5 ملليلتر باستخدام 4 ملليلتر من الوسط الكامل. بعد ذلك ، قم بإزالة السلك من عبوته الزجاجية. اغمس الجزء الذهبي الوظيفي من السلك في القارورة مع التأكد من أن سدادة السلك مناسبة لتسرب الماء لقارورة 5 مل. ختم السلك بفيلم مختبر. ثم احتضان السلك في دوار أنبوبي لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد الدوران ، اشطف السلك ثلاث مرات في محلول PBS ذو طية واحدة باستخدام ثلاث قوارير نظيفة مختلفة وانتظر حتى يجف السلك.
بعد تجفيف السلك بالهواء لمدة 10 دقائق في غطاء ، قم بإصلاح الخلايا عن طريق غمس السلك في محلول الأسيتون بنسبة 100٪ في أنبوب سعة 5 ملليلتر لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تأكد من عدم وجود أثر للأسيتون على الطرف الوظيفي. جفف السلك بالهواء لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، في أنبوب سعة 5 ملليلتر ، اغسل السلك مرتين في طية واحدة PBS. احتضان السلك في مخزن مؤقت لتخفيف الأجسام المضادة.
قم بإعداد 150 ميكرولتر من مزيج الأجسام المضادة مع تخفيف الجسم المضاد الأولي أحادي النسيلة المقترن بالفلوروكروم ومخزن تخفيف الأجسام المضادة كما هو محدد في ورقة البيانات. ثم استخدم طرف P200 لاستخراج السلك من سدادة السلك وإدخال السلك برفق من خلال الفتحة الأكبر للطرف. أدخل الطرف غير الوظيفي أولا واسحب السلك ببطء من خلال الفتحة الأصغر حتى يصبح الجزء الذهبي خارج الفتحة الأكبر مباشرة. أضف برفق 150 ميكرولترا من مزيج الجسم المضاد إلى الطرف.
لتجنب خطر تكوين الفقاعات ، قم بتدوير السلك برفق حتى يتم غمر الطرف الوظيفي تماما. أغلق فتحة الطرف ولف فيلم المختبر حول الفتحة. احتضن السلك عموديا طوال الليل في الظلام عند 4 درجات مئوية. في اليوم الثاني ، قم بمنع حضانة الأجسام المضادة عن طريق غسل السلك مرتين في طية واحدة PBS. أعد إدخال السلك في سدادة السلك.
تصف هذه المقالة طريقة لالتقاط الخلايا الورمية المتداولة (CTCs) باستخدام سلك وظيفي مغلف بالأجسام المضادة. تتضمن العملية تحضين السلك مع الخلايا الورمية، يليه صبغ مناعي فلوري لتحديد الخلايا الورمية المتداولة المرتبطة.
تتيح مقايسات التألق المناعي للخلايا الورمية المتداولة (CTCs) التي يتم التقاطها على أسلاك طبية وظيفية تحديداً مباشراً وفي الموقع للخلايا الورمية النادرة من دم المريض. يعالج هذا النهج تحدياً حرجاً في مرحلة الاكتشاف من خلال توفير منصة قوية للتحقق من الأهداف والحد من المخاطر الميكانيكية في مسارات تطوير أدوية الأورام. وتعزز هذه الطريقة الثقة التنبؤية عند نقطة التلاقي بين الاكتشاف المبكر والأبحاث الانتقالية، مما يدعم قرارات المحفظة الاستثمارية المعدلة حسب المخاطر.
يندمج هذا المقايسة المناعية الفلورية ضمن سلسلة اكتشافات علم الأورام بدءًا من التحقق المبكر من الهدف وصولاً إلى الأبحاث قبل السريرية، مما يتيح القياس المباشر للخلايا الورمية المتداولة (CTCs) كعلامات حيوية انتقالية.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 22 أغسطس 2026