مقايسة التألق المناعي: طريقة لتحديد الخلايا السرطانية الملتقطة على سلك طبي

- خذ سلكا وظيفيا يحتوي على جزء ذهبي صغير مغطى بهيدروجيل مقترن بالأجسام المضادة ذات الأهمية. اغمس الجزء الذهبي من السلك في قارورة تحتوي على خلايا سرطانية. أغلقه بسدادة سلكية ، واحتضنه في دوار أنبوبي. ترتبط الخلايا السرطانية المنتشرة أو CTCs التي تعرض مستضدات سطحية بالأجسام المضادة الموجودة على السلك. اشطف السلك عن طريق غمسه في قوارير تحتوي على محلول ملحي مخزن بالفوسفات أو PBS وجففها في الهواء. الآن قم بغمس السلك في محلول الأسيتون لإصلاح الخلايا عن طريق تجفيفها.

بعد ذلك ، أدخل السلك برفق من خلال طرف P200 مع الجزء الوظيفي بداخله. املأ الشريط بجسم مضاد مترافق مع فلوروكروم لغمر السلك. ترتبط هذه الأجسام المضادة المسماة بالمستضدات الخاصة بها الموجودة في الخلايا. أغلق الفتحة بغشاء مختبري واحتضنه طوال الليل في الظلام عند 4 درجات مئوية. بعد ذلك ، اغسل السلك باستخدام PBS لإزالة أي أجسام مضادة غير مرتبطة. ضع السلك في حامل سلك واعرضه تحت المجهر الفلوري. تتألق الخلايا السرطانية السرطانية المرتبطة بالأجسام المضادة على السلك. في البروتوكول التالي ، سنلتقط CTCs على سلك طبي ونتعرف عليها عن طريق تلطيخ الفلورسنت المناعي.

- لبدء التجربة ، أعد تعليق محتويات قارورة T75 بالكامل عند التقاء 80٪ في قارورة سعة 5 ملليلتر باستخدام 4 ملليلتر من الوسط الكامل. بعد ذلك ، قم بإزالة السلك من عبوته الزجاجية. اغمس الجز