التلوين الكيميائي المناعي: طريقة للحصول على المعلومات المكانية من أقسام الأنسجة الرقيقة

- ابدأ بوضع قسم رقيق من الأنسجة في محلول الأمونيا للسماح باسترجاع المستضد اللطيف. انقل القسم إلى شريحة مطلية بالبولييسين. ترتبط الخلايا سالبة الشحنة بالبولييسين موجب الشحنة. بعد ذلك ، أضف بيروكسيد الهيدروجين لمنع نشاط البيروكسيديز الداخلي. اغسل الشريحة في محلول ملحي مخفض من Tris، TBS.

يعزز TBS وصول الأجسام المضادة إلى المستضدات عن طريق كسر الروابط المتشابكة للبروتين. اغسل القسم بمحلول كتلة لتقليل ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة. أضف الأجسام المضادة الأولية إلى القسم واحتضن طوال الليل. يرتبط الجسم المضاد الأساسي بمستضد محدد موجود على سطح الخلية. اغسل الشريحة باستخدام TBS.

أضف الأجسام المضادة الثانوية المترافقة مع البيوتين التي ترتبط بمنطقة Fc من الجسم المضاد الأساسي. اغسل القسم بإنزيم ستربتافيدين بيوتين بيروكسيداز. بعد ذلك ، أضف الركيزة الكروموجينيكة من البيروكسيديز إلى الأنسجة. يحول بيروكسيداز الكروموجين إلى منتج ملون غير قابل للذوبان.

مضاد للأنسجة بمحلول الهيماتوكسيلين. يرتبط الهيماتوكسيلين بالمكونات الحمضية للخلايا ويحولها إلى اللون الأزرق. راقب الأنسجة تحت المجهر الضوئي. يتم الكشف عن المستضدات باللون الأحمر بينما تظهر الخلايا باللون الأزرق بسبب الهيماتوكسيلين. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء تلطيخ كيميائي مناعي لتحديد خلايا CD45 و CD1a من الخزعات داخل القصبة.

- قبل تقطيع