التلوين الكيميائي المناعي: طريقة للحصول على المعلومات المكانية من أقسام الأنسجة الرقيقة

0 views • 4:52 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- ابدأ بوضع قسم رقيق من الأنسجة في محلول الأمونيا للسماح باسترجاع المستضد اللطيف. انقل القسم إلى شريحة مطلية بالبولييسين. ترتبط الخلايا سالبة الشحنة بالبولييسين موجب الشحنة. بعد ذلك ، أضف بيروكسيد الهيدروجين لمنع نشاط البيروكسيديز الداخلي. اغسل الشريحة في محلول ملحي مخفض من Tris، TBS.

يعزز TBS وصول الأجسام المضادة إلى المستضدات عن طريق كسر الروابط المتشابكة للبروتين. اغسل القسم بمحلول كتلة لتقليل ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة. أضف الأجسام المضادة الأولية إلى القسم واحتضن طوال الليل. يرتبط الجسم المضاد الأساسي بمستضد محدد موجود على سطح الخلية. اغسل الشريحة باستخدام TBS.

أضف الأجسام المضادة الثانوية المترافقة مع البيوتين التي ترتبط بمنطقة Fc من الجسم المضاد الأساسي. اغسل القسم بإنزيم ستربتافيدين بيوتين بيروكسيداز. بعد ذلك ، أضف الركيزة الكروموجينيكة من البيروكسيديز إلى الأنسجة. يحول بيروكسيداز الكروموجين إلى منتج ملون غير قابل للذوبان.

مضاد للأنسجة بمحلول الهيماتوكسيلين. يرتبط الهيماتوكسيلين بالمكونات الحمضية للخلايا ويحولها إلى اللون الأزرق. راقب الأنسجة تحت المجهر الضوئي. يتم الكشف عن المستضدات باللون الأحمر بينما تظهر الخلايا باللون الأزرق بسبب الهيماتوكسيلين. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء تلطيخ كيميائي مناعي لتحديد خلايا CD45 و CD1a من الخزعات داخل القصبة.

- قبل تقطيع أنسجة الخزعة المضمنة ، اضبط حامل السكين بعناية في زاوية كتلة الخزعة بحيث تستقر الشفرة بشكل مسطح على سطح الكتلة. ثم قم بقص قسمين على الأقل بسمك 2 ميكرون من كل عينة خزعة داخل القصبة الهوائية ، باستخدام ملقط لنقل كل شريحة من الأنسجة المقطوعة حديثا إلى محلول أمونيا وماء مقطر بنسبة 0.05٪. بعد 45 إلى 90 ثانية ، استخدم شريحة مجهر مطلية ب poly-l-lysine لالتقاط كل قسم مفتوح والسماح للأقسام بالجفاف لمدة ساعة على الأقل.

عندما تجف الأقسام ، قم بتسمية الشرائح حسب المناسبة للتجربة وارسم حاجزا كارها للماء حول كل عينة. بعد ذلك ، ضع 1 مليلتر من محلول كتلة البيروكسيديز المحضر حديثا على الأقسام. بعد 30 دقيقة ، قم بإزالة محلول كتلة البيروكسيديز ثم اغسل الأقسام ثلاث مرات لمدة خمس دقائق باستخدام TBS ، ثم قم بإزالة TBS وأضف محلول حجب BSA بنسبة 1٪ لمدة 30 دقيقة أخرى لمنع أي ارتباط غير محدد للأجسام المضادة.

في نهاية الحضانة ، أضف الجسم المضاد الأساسي المعني ، المخفف في TBS ، وقم بتغطية العينات للحضانة طوال الليل في درجة حرارة الغرفة. في صباح اليوم التالي ، اغسل الشرائح ثلاث مرات في TBS وقم بتطبيق الجسم المضاد الثانوي المعني لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة ، اغسل الشرائح ثلاث مرات أخرى في TBS الطازج واحتضان العينات في محلول مركب ستربتافيدين بيوتين بيروكسيداز طازج لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة متبوعا بثلاث غسلات أخرى من TBS.

ثم عالج الأطباق بمحلول الركيزة الطازج AEC peroxidase لمدة 20 إلى 30 دقيقة. عندما تتطور شدة البقعة المرغوبة ، اشطف الشرائح بماء الصنبور الجاري لمدة خمس دقائق وقم بتلطيخ الأقسام بمحلول الهيماتوكسيلين المصفى من ماير. بعد دقيقتين ، اغسل الشرائح بماء الصنبور الجاري لمدة خمس دقائق أخرى ، ثم صفي الشرائح وقم بتغطية الأقسام بوسط تركيب مائي دائم ، وتجفيف العينات في فرن تجفيف 80 درجة مئوية.

بعد أن تبرد ، قم بتركيب العينات بوسيط تركيب DPX وزلة غطاء لتحليلها بتكبير 40 مرة على مجهر ضوئي.

07:52

تحليل الرئوي نضوج خلية شجيري والهجرة خلال التهاب الشعب الهوائية التحسسي

Related Videos

0 Views

10:11

تلوين المناعى من H1-B7 (PD-L1) على البارافين جزءا لا يتجزأ من النسيج الشرائح غدية البنكرياس

Related Videos

0 Views

09:33

الرئة ماوس شرائح لتصور لايف الخلايا الجذعية الرئوي قطع الدقة

Related Videos

0 Views

08:12

Sectioning رقيقة من الاستعدادات لشريحة المناعية

Related Videos

0 Views

20:47

تقنية لتصور في الوقت نفسه للفيروسات محددة CD8 + الخلايا T والخلايا المصابة بالفيروسات في الموضع

Related Videos

0 Views

05:04

تقنية وضع العلامات المناعية لتصور التوطين الخلوي للبروتينات

Related Videos

0 Views

07:30

التمهيدي لالمناعية على نسيج Cryosectioned دماغ الفئران: مثال تلطيخ لالدبقية الصغيرة والخلايا العصبية

Related Videos

0 Views

08:54

المناعية الأقسام مملوءة Biocytin والمجهزة لالكيميائية العصبية علامات

Related Videos

0 Views

08:37

في الموقع تلوين تيترامير MHC والتحليل الكمي تحديد الموقع، ووفرة، والنمط الظاهري للخلايا التائية CD8 محددة مستضد في الأنسجة

Related Videos

0 Views

11:00

التصور، القياس الكمي، ورسم خرائط للخلايا المناعية في البيئة الدقيقة الورم

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026