عزل الإكسوسوم: تقنية لفصل الإكسوسومات عن بلازما مرضى سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة

- الإكسوسومات عبارة عن حويصلات صغيرة مرتبطة بالغشاء تحمل جزيئات حيوية مثل الدهون والبروتينات والحمض النووي والحمض النووي المرسال والحمض النووي الريبي الميكرورينا. يتم إطلاق الإكسوسومات بواسطة أنواع مختلفة من الخلايا في المساحات خارج الخلية ويمكن عزلها عن السوائل الحيوية مثل البلازما.

للبدء ، قم بالطرد المركزي لعينة البلازما لإزالة الخلايا والحطام. انقل المادة الطافية في البلازما إلى أنبوب جديد. عالج البلازما بالتركيز المطلوب من إنزيم الريبونوكلياز. احتضان العينة على كتلة تسخين عند 37 درجة مئوية لمدة مناسبة.

يحلل الإنزيم أي حمض نووي حر في العينة ، بينما يظل الحمض النووي الريبي الخارجي محميا. تمييع العينة باستخدام PBS. بعد ذلك ، أضف التركيز المطلوب من محلول إنزيم Proteinase K واحتضنه عند 37 درجة مئوية لفترة مناسبة. يحلل البروتيناز K الجزء الأكبر من بروتينات البلازما. كما أنه يعطل إنزيم الريبونوكلياز المضاف سابقا ، وبالتالي القضاء على خطر تدهور الحمض النووي الريبي الخارجي أثناء المعالجة النهائية

أضف حجما مناسبا من المخزن المؤقت لهطول الأمطار لتسهيل فصل الإكسوسوم عن البلازما. الطرد المركزي للعينة للحصول على حبيبات تحتوي على الإكسوسومات السليمة. تجد الإكسوسومات المعزولة تطبيقات في خطوات المصب مثل استخراج الحمض النووي الريبي والبروتين.

في البروتوكول التالي ، سنقوم بعزل الإكسوسوم من عينة