أسماك الحمض النووي ثلاثية الأبعاد: تقنية لتحديد موقع جين معين على الكروموسوم

- خذ سلكا وظيفيا به خلايا متصلة على سطحه وملطخة بتلطيخ التألق المناعي. اغسلها بمحلول ملحي مثلج أو محلول SSC. ضع السلك في أنبوب دقيق يحتوي على مجسات ذات علامات فلورية ، وأغلقه بسدادة سلكية. احتضان الأنبوب الدقيق في غرفة رطبة مظلمة في فرن تهجين عند 75 درجة مئوية لتغيير طبيعة الحمض النووي داخل الخلايا.

انقل الغرفة إلى فرن عند 37 درجة مئوية حتى تلتصق المجسات بالتسلسل التكميلي على الحمض النووي. بعد ذلك ، أخرج الغرفة من الفرن وأخرج السلك. اغمس السلك في أنبوب يحتوي على محلول SSC عند درجة الحرارة المطلوبة. اغسل السلك بمحلول SSC الذي يحتوي على Tween لإزالة المجسات غير المحددة أو المهجنة جزئيا ، واغسلها مرة أخرى بالماء المقطر.

جفف السلك واحتضان الطرف الوظيفي في محلول DAPI لتلطيخ نوى الخلية. اشطف السلك في PBS وجففه بالهواء. ضع السلك تحت المجهر الفلوري. يظهر المسبار المهجن مع الجين محل الاهتمام كبقعة فلورية في نوى الخلية. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء 3D DNA FISH لتحديد انتقال جين ALK في خلايا سرطان الرئة.

- قبل 3 ساعات من بروتوكول DNA FISH ، اضبط فرن التهجين على 75 درجة مئوية ، واضبط الفرن الجاف على 37 درجة مئوية. قم بتبريد محلول SSC بمقدار 0.4 أضعاف إلى 4 درجات مئوية. اغسل السلك ثلاث مرات في محلول SSC المثلج 0.4 ضعف. جفف السلك في الظلام تحت خزانة غطاء الدخان لمدة 10 دقائق.

بعد 10 دقائق