توليد الخلايا المتغصنة المشتقة من نخاع العظام: طريقة لتوليد الخلايا المتغصنة من نخاع عظم الفأر

- الخلايا المتغصنة أو DCs هي خلايا رئيسية تقدم مستضد تنشط الخلايا التائية. في مرضى سرطان الدم ، تعبر هذه الخلايا بشكل سيئ عن المستضد المرتبط بالورم وتفشل في استنباط استجابة مناعية خاصة بالمستضد. الخلايا المتغصنة وفيرة في نخاع العظام. وبالتالي ، فإن نخاع العظم هو الموقع المفضل لعزلهم للمساعدة في دراسة دورهم في السرطان.

للحصول على الخلايا المتغصنة ، استخرج نخاع العظم من عظم الفخذ أو عظم الساق للفأر القتل الرحيم باستخدام حقنة مملوءة بالوسائط لطردها. أجهزة الطرد المركزي وإعادة تعليق الحبيبات في محلول الأمونيوم كلوريد البوتاسيوم أو ACK لتحلل كريات الدم الحمراء. أضف الآن وسائط الثقافة لوقف التحلل والطرد المركزي. أعد تعليق الحبيبات في وسط الاستزراع الذي يحتوي على مضاد حيوي. أضف عامل تحفيز مستعمرة الخلايا الحبيبية والبلاعم أو GM-CSF ، وانقل تعليق الخلية إلى صفيحة بتري.

احتضان اللوحة للمدة الزمنية المطلوبة. يساعد GM-CSF الخلايا السلفية على التمايز إلى خلايا متغصنة. أخيرا ، قم بتنشيط الخلايا بعديدات السكاريد الدهنية أو LPS ، والتي ترتبط بالمستقبلات السطحية للخلايا المتغصنة ، مما ينتج عنه خلايا تغصنية نخاع العظم ناضجة تماما ومناعية. في هذا البروتوكول ، سنوضح توليد الخلايا المتغصنة من نخاع عظم الفأر.

- لتوليد خلايا شجيرية مشتقة من نخاع العظام ، قم بعزل نخاع العظم عن عظم الفخذ من النوع البري أو الفئران بالضربة القاضية بالعامل B ، كما هو موضح ، وقم بتحلل خلايا الدم الحمراء في 5 ملليلتر من محلول تحلل ACK ، وإيقاف التفاعل ب 10 ملليلتر من RPMI ، مع استكمال 1٪ FBS بعد خمس دقائق.

بعد جمع خلايا الدم الكاملة عن طريق الطرد المركزي ، قم بإعادة تعليق الحبيبات في 10 ملليلتر من وسط الثقافة إلى 2 مرات 10 إلى 6 خلايا لكل تركيز مليلتر وأضف 20 نانوغرام لكل مليلتر من GM-CSF إلى الخلايا ، قبل زرع 10 ملليلتر من الخلايا على أطباق بتري فردية 100 × 15 ملم عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ستة أيام. في اليوم السادس, تنشيط مزارع الخلايا الشجيرية المشتقة من نخاع العظام مع 25 ميكروغرام لكل ملليلتر من LPS لكل لوحة.