موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:11 دقيقة • April 30th, 2023
- العضيات هي مزارع خلايا صغيرة ثلاثية الأبعاد مشتقة من الخلايا الجذعية الخاصة بالأنسجة. إنها مستقرة جينومية ولكنها قابلة للتعديل وراثيا من خلال التعدي وبالتالي فهي مثالية للتحقيق الجيني. بالنسبة للتعدين ، فإن عضيات البذور في صفيحة استزراع متعددة الآبار مع وسط ثقافة محدد وتحتضن للمدة المطلوبة. بعد ذلك ، أضف خليط التفكك إلى الطبق للمساعدة في تفكك الخلايا العضوية. انقل الخليط إلى أنبوب وجهاز طرد مركزي. أعد تعليق الحبيبات العضوية في مخزن مؤقت للتثقيب الكهربائي يحتوي على الحمض النووي البلازميد المسمى بالفلورسنت. يعمل المخزن المؤقت على استقرار الخلايا ويمنع موت الخلايا بسبب الإجهاد الكهربائي.
انقل الخليط إلى كوفيت وقم بتغذية الخلايا بالكهرباء. تؤدي النبضات الكهربائية عبر غشاء الخلية إلى تكوين مسام مؤقت لتسهيل امتصاص الحمض النووي البلازميد في الخلية. بعد التثقيب الكهربائي ، أضف وسط الثقافة على الفور إلى تعليق الخلية وانقل الخليط إلى أنبوب. الآن ، قم بالطرد المركزي للخلايا. أعد تعليق الحبيبات في مصفوفة الطابق السفلي وانقلها إلى اللوحة متعددة الآبار للبلمرة. ضع اللوحة تحت مجهر الفلورسنت وتحقق من وجود مضان في الخلايا ، مما يؤكد التعداء الفعال. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء التثقيب الكهربائي لنقل عضيات الجهاز الهضمي.
- ابدأ بالتسخين المسبق للألواح المكونة من 48 بئرا عند 37 درجة مئوية لل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية