تصوير ديناميكيات الكالسيوم في خلايا البنكرياس: تقنية لدراسة التغيرات في الوقت الفعلي في تركيز الكالسيوم العصاري الخلوي في جزيرة البنكرياس

- جزر البنكرياس هي مجموعة من خلايا البنكرياس المنتجة للهرمونات والتي تلعب دورا مهما في الحفاظ على توازن الجلوكوز. يؤدي تركيز الجلوكوز المرتفع إلى إغلاق قنوات أيونات البوتاسيوم ، مما يمنع تدفق أيونات البوتاسيوم ، مما يؤدي إلى إزالة استقطاب الغشاء. نتيجة لذلك ، تفتح قنوات أيونات الكالسيوم المعتمدة على الجهد ، مما يسمح بتدفق أيونات الكالسيوم. يحفز هذا التركيز المتزايد للكالسيوم العصاري الخلوي إفراز هرمونات مثل الأنسولين. في الوقت الفعلي ، لتصوير ديناميكيات الكالسيوم العصارية الخلوية ، انقل بعض الجزر المحملة بصبغة مؤشر الكالسيوم المناسبة بين جدران الفاصل لشبكة دقيقة مجمعة مسبقا.

ضع الشبكة رأسا على عقب على غطاء داخل غرفة التصوير بالمجهر المقلوب. ضع شبكة خشنة ووزنا لشل حركة الخلايا. أضف محلول التصوير إلى الغرفة. بعد ذلك ، قم بإعداد نظام التروية لإدخال الجلوكوز أو هرمون الاختبار ذي الأهمية. داخل الخلايا ، تشير مؤشرات الكالسيوم الفلوري المحملة مسبقا إلى أي زيادة في تركيزات الكالسيوم العصاري الخلوي. عند الارتباط بأيونات الكالسيوم ، تظهر جزيئات المؤشر زيادة كبيرة في انبعاث التألق. في البروتوكول التالي ، سنعرض التصوير في الوقت الفعلي لديناميكيات الكالسيوم في جزر البنكرياس الفئرانية استجابة لتروية الجلوكوز.

- لتثبيت الجزر الصغيرة للتصوير ، قم بتجميع غرفة تصوير لمجهر مقلوب وضع غطاء زجاجي داخل ا