موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:21 دقيقة • April 30th, 2023
- يشكل الجزء الخارجي من البنكرياس خلايا أسينار وخلايا قنوية. تقوم خلايا الأسينار بتصنيع وتفرز إنزيمات الجهاز الهضمي في تجويفها. تبطن الخلايا الأقنية الأنبوب الذي ينقل هذه الإنزيمات إلى الأمعاء الدقيقة. للتكيف مع الإجهاد الوراثي والبيئي ، تخضع خلايا أسينار لتحويل مورفولوجي ووظيفي إلى خلايا شبيهة بالقنوات ، تسمى حؤول أسينار إلى قنوي ، أو ADM.
في بعض الأحيان ، قد يؤدي ADM إلى ظهور سرطان البنكرياس. للحث على ADM ex vivo ، قم بإعداد معلق خلية الكولاجين المبرد عن طريق الجمع بين خلايا الأسينار الأولية مع هلام الكولاجين المحفوظ على الجليد لمنع تصلب المصفوفة. عالج التعليق باختبار ADM المنشط أو مثبط الفائدة.
قم بتوزيع المعلق في صفيحة مزرعة واحتضانه لتسهيل تصلب الكولاجين وتضمين الخلايا بداخله. بعد ذلك، قم بتعبئة كمية إضافية من الوسائط التي تحتوي على منبه ADM للاختبار أو مثبط الاهتمام على طبقة خلايا الكولاجين الصلبة.
احتضان اللوحة لمدة مناسبة. مع تحريض الحؤول من أسينار إلى قنوي ، تتمايز خلايا الأسينار الأولية على شكل هرمي لتشكيل خلايا ذات مورفولوجيا تشبه خلايا القناة. في البروتوكول التالي ، سنوضح الحث خارج الجسم الحي لحؤول أسينار إلى قنوي في خلايا أسينار الفئران الأولية باستخدام TGF alpha كمنشط.
- لصنع جل الكولاجين ، امزج 7 ملليلتر من كولاجين ذيل الفئران من النوع 1 ، و 700 ميكرولتر من 10 أضعاف وسط وايموث ، و 466.6 ميكرولتر من 0.34 مولار هيدروكسيد الصوديوم في أنبوب سعة 50 مليلتر على الثلج لصنع هلام الكولاجين. في أنبوب سعة 50 مليلتر ، امزج كميات متساوية من تعليق الخلايا وهلام الكولاجين بعد ثلاث ساعات من الحضانة واخلطها برفق. طبق 2,000 ميكرولتر بئر واحد في كل مرة في طبق من ستة آبار مع إبقاء الطبق على الجليد ، وقم بتحريكه لتوزيع طبقة خلية الكولاجين بالتساوي.
لتصلب الوسط ، احتضن اللوحة في حاضنة زراعة الخلايا عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 30 دقيقة. ثم أضف 1.5 مل لكل بئر من 1 مرة وسط Waymouth الكامل مع المحفزات أو المثبطات المرغوبة.
قم بتغيير الوسيط في اليوم التالي ثم كل يومين. اعتمادا على الحافز المستخدم ، يمكن ملاحظة حؤول أسينار إلى قنوي ، أو ADM ، بين اليوم الثالث واليوم الخامس.