عزل جزر البنكرياس من خلال نضح الكولاجيناز: طريقة إنزيمية لعزل خلايا جزر البنكرياس

- تنتج الخلايا الجزرية في البنكرياس هرمونات أساسية تشارك في وظائف الغدد الصماء. لعزل الجزر ، أولا ، قم بتأمين فأر قتل رحيم وفضح تجويف البطن جراحيا. قم بتنظيف الكبد والأمعاء جانبا لتحديد موقع القناة الصفراوية المشتركة وتثبيتها. حدد أمبولة فاتر ، القناة التي تشكلت من اتحاد البنكرياس والقنوات الصفراوية الشائعة.

بعد ذلك ، قم بحقن محلول إنزيم الكولاجيناز في القناة الصفراوية المشتركة. يعمل التدفق العكسي من القناة على تضخيم البنكرياس بنجاح ، مما يسهل تفكك أنسجة البنكرياس الناجم عن الكولاجيناز. استئصال البنكرياس في أنبوب يحتوي على المزيد من محلول الكولاجيناز. قم بتقطيع الأنسجة ميكانيكيا واحتضانها للمساعدة في هضم الأنسجة بواسطة الكولاجيناز.

بمجرد الحصول على تعليق متجانس ، أوقف الهضم الأنزيمي عن طريق إضافة محلول يحتوي على بروتينات تمنع نشاط الكولاجيناز. جهاز طرد مركزي لجمع حبيبات الأنسجة. أعد تعليق الحبيبات في وسط تدرج الكثافة المناسب ، ووضع طبقة عازلة مناسبة فوقها ، وجهاز طرد مركزي لتوليد طبقات متدرجة.

اجمع الجزر الصغيرة من الطبقة المتكونة بين وسط تدرج الكثافة والمخزن المؤقت. أخيرا ، اختر الجزر الصغيرة الصحية للزراعة. في البروتوكول التالي ، سنوضح عزل جزر البنكرياس الفئرانية عن طريق إعطاء الكولاجيناز متبوعا بالطرد المركزي المتدرج للكثافة.

- ابدأ بلصق أطراف الفأر في وضع ضعيف ورش الجسم بنسبة 7