موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:29 دقيقة • April 30th, 2023
- الكرويات هي نماذج ثلاثية الأبعاد لزراعة الخلايا في المختبر. بالنسبة لتلوين الفلورسنت المناعي ، أولا ، قم بإنشاء ثقافة كروية من نوع الخلية المطلوب في صفيحة متعددة الآبار. باستخدام ماصة دقيقة ذات طرف فتحة عريضة ، اجمع الكرويات ، مع الحرص على تجنب التمزق بسبب قوى القص.
بعد ذلك ، قم بإصلاح الكرات ونفاذها لجعل الخلايا الفردية قابلة للنفاذ. الآن ، احتضن بمحلول يحتوي على بروتينات لمنع مواقع تفاعل البروتين غير المحددة على سطح الخلية. عالج الكرات بكوكتيل الأجسام المضادة الأولية المرغوبة. احتضان الأجسام المضادة للارتباط بالجزيئات المستهدفة على سطح الخلية.
بعد ذلك ، قم بتسمية الأجسام الكروية بمحلول أجسام مضادة ثانوية مصنفة فلورسنت خاص بالأجسام المضادة الأولية. أخيرا ، عالج الكرات بصبغة مناسبة ملزمة للحمض النووي الفلوري لتلطيخ نوى الخلايا. باستخدام مجهر مضان بالمسح بالليزر ، قم بتصوير مقاطع عرضية بصرية متعددة للكروي في مستويات بصرية مختلفة.
تعكس الصور الملتقطة النوى والمستضدات ذات العلامات الفلورية ذات الأهمية. ادمج المكدسات باستخدام البرامج ذات الصلة للحصول على الصورة المركبة النهائية للكروي ثلاثي الأبعاد. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء تلطيخ فلوري مناعي للكبوتات الكروية للأرومات الليفية البنكرياسية والخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان المزروعة في وجود منبه ، TGF beta 1.
- أولا ، قم بقطع
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية