مقايسة التدفق خارج الخلية في الأجسام الكروية ثلاثية الأبعاد: طريقة لقياس النشاط الأيضي لكرويات ورم البنكرياس
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:39 دقيقة • April 30th, 2023
- تتفاعل خلايا سرطان البنكرياس مع الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان في البيئة المكروية للورم أو TME. تعدل هذه التفاعلات النشاط الأيضي للخلايا السرطانية وتؤثر على تطور السرطان.
الكرويات هي المجاميع الخلوية التي تلخص TME في المختبر. لذلك ، يمكننا استخدام هذه الكرويات لاختبار التغيرات في وظائف التمثيل الغذائي للورم عن طريق مقايسة التدفق خارج الخلية. يقيس هذا الاختبار تركيز الأكسجين والبروتونات خارج الخلية لتحديد التمثيل الغذائي الهوائي وتحلل السكر ، على التوالي.
ابدأ بأخذ الكرات الكروية ثلاثية الأبعاد ذات الحجم المناسب التي تم تصنيعها عن طريق زراعة خلايا سرطان البنكرياس مع الخلايا الليفية البنكرياسية. الآن ، انقل الكرويات إلى لوحة تحليل التدفق وقم بتغطيتها بخرطوشة مستشعر تحتوي على أدوية الاختبار. قم بتشغيل الاختبار في محلل التدفق خارج الخلية.
يقوم محلل التدفق بحقن أدوية الاختبار بالهواء المضغوط من خرطوشة المستشعر إلى لوحة التحليل في نقاط زمنية محددة. استجابة لأدوية الاختبار ، تطلق الخلايا البروتونات والأكسجين في الغرفة الدقيقة للوحة وتقيس الفلوروفورات الموجودة في مسبار المستشعر هذه المستويات. أخيرا ، باستخدام البرامج المناسبة ، قم بتحليل وظائف الكرويات.
في البروتوكول التالي ، سنوضح طريقة لقياس الوظيفة الأيضية لخلايا ورم البنكرياس الموجودة في الكرويات ثلاثية الأبعاد باستخدام مقايسة الت
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية