موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:08 دقيقة • April 30th, 2023
- تتيح الخلايا السرطانية التي تعبر عن بروتين الفلورسنت الأخضر أو GFP مراقبة نمو الورم والورم الخبيث عن طريق التصوير البصري غير الجراحي. عادة ما نقوم بزرع هذه الخلايا في نموذج تقويم العظام ، والذي يسمح بإعادة إنشاء البيئة المكروية للورم ويحاكي تفاعل الخلايا السرطانية مع محيطها.
ابدأ بوضع فأر مخدر على وسادة تسخين دافئة. الآن ، أدخل أنفه في قناع الأنف لتزويد الأكسجين والأيزوفلوران ، وهو مخدر. باستخدام مقص ، قم بعمل شق صغير وقطع الأنسجة. اسحب الطحال برفق مع البنكرياس وحدد موقع ذيل البنكرياس.
قم بتحميل حقنة بتعليق الخلايا السرطانية الفلورية وحقنها برفق في ذيل البنكرياس. تظهر فقاعة سطحية في موقع الحقن تؤكد نجاح عملية الزرع. ضع الأعضاء مرة أخرى في تجويف الجسم واستخدم خياطة معقمة لإغلاق الشق. الآن ، أعد الماوس إلى قفص وراقبه حتى التعافي.
بعد المدة المطلوبة ، ضع الماوس في غرفة التصوير والتقط الصور. يضرب شعاع الضوء الخلايا السرطانية ويثير GFP ، والذي بدوره ينتج مضان أخضر. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء عملية زرع جراحية لخلايا سرطان البنكرياس التي تعبر عن GFP في نموذج فأر الفئران التقويمي.
لزرع الخلايا ، أولا ، ضع مرهما على عيون الفأر المخدر وضع على وسادة تدفئة مغطاة بستارة معقمة. بعد ذلك ، قم بتطهير جناح برفق بثلاثة مقشرات من اليود متبوعة بثلاث شطفات من الإيثانول بنسبة 70٪. بعد التأكد من عدم الاستجابة لقرص إصبع القدم ، قم بتحميل ما يقرب من 200 ميكرولتر من الخلايا المحضرة في حقنة TB 1 ملليلتر مبردة مسبقا ومجهزة بإبرة قياس 18.
استبدل الإبرة قياس 18 بإبرة قياس 27 وضع الخلايا مرة أخرى على الجليد. بعد ذلك ، حدد موقع المنطقة العامة للطحال في الربع العلوي الأيسر من البطن. باستخدام الملقط ، اضغط على الجلد فوق الطحال وقم بعمل شق بطول 1 سم تقريبا لإنشاء جيب. بعد ذلك ، اضغط على العضلة الملساء أعلى الطحال واقطع الأنسجة للوصول إلى التجويف البريتوني.
بعد ذلك ، أمسك الطرف الذيلي للطحال برفق واسحبه من تجويف الجسم. باستخدام قطعة قطن معقمة مبللة ، انشر البنكرياس المتصل بنهاية الطحال لتحديد موقع ذيل البنكرياس. قم بتوصيل 50 ميكرولترا من الخلايا إلى ذيل البنكرياس. ثم قم بتدوير الإبرة ببطء من البنكرياس.
سيبدو الزرع الناجح وكأنه فقاعة سطحية دون أي تسريبات. أعد الأعضاء إلى التجويف البريتوني وقم بإحاطة كل شيء بالعضلات والجلد. ثم استخدم خياطة 6-0 لإغلاق الشق. بعد ذلك ، قم بحقن بالكيتوبروفين وراقبها حتى تتعافى تماما. في النقطة الزمنية التجريبية المناسبة ، استخدم نظام صور صغيرة تجاري لتصوير نمو الورم في الحي تحت التخدير وتحديد مرشحات الإثارة والانبعاث المناسبة.
بعد ذلك ، احصل على صورة أولية باستخدام الضوء الأبيض فقط. حافظ على في نفس الوضع ، وقم بالتبديل إلى مرشحات GFP واحصل على صورة ثانية. لتحليل نمو الورم ، قم بتركيب الصور البيضاء والفلورية لتقييم مساحة الفلورسنت وشدة الخلايا السرطانية.