JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 3:14 د • April 30th, 2023
- الخلايا الجذعية لسرطان البنكرياس أو CSCs هي مجموعة فرعية من الخلايا السرطانية المتجددة ذاتيا ويمكن أن تؤدي إلى ظهور الورم بأكمله. توجد الخلايا الجذعية الدماغية في مكان محمي جيدا يتكون من خلايا أخرى ، مثل الخلايا الليفية والخلايا المناعية والخلايا البطانية ومكونات المصفوفة خارج الخلية ، مثل السيتوكينات وعوامل النمو. تساعد التفاعلات التي تحدث بين الخلايا في مثل هذه البيئة الخلايا الجذعية الدماغية على التكاثر وزيادة نمو الورم.
لدراسة خصائص الخلايا الجذعية الدماغية ، نقوم بعزلها عن أورام البنكرياس. ابدأ بأخذ معلق الخلية من أنسجة ورم البنكرياس البشري في وسط نمو CSC. بعد ذلك ، قم بزرع المعلق ، الذي يتكون بشكل أساسي من الخلايا الليفية و CSCs ، على صفيحة مطلية بالجيلاتين واحتضانها للمدة المطلوبة. تلتصق الخلايا الليفية بسطح الجيلاتين ، تاركة الخلايا الجذعية السرطانية العائمة بحرية في تعليق الخلية.
خذ كمية صغيرة من تعليق الخلية وأضف التريبان الأزرق. ماصة هذا الخليط إلى مقياس الدم وحساب عدد الخلايا القابلة للحياة. يدخل التريبان الأزرق الخلايا الميتة ويلطخها باللون الأزرق تاركا الخلايا الحية عديمة اللون. أخيرا ، قم بتخزين CSCs لمزيد من التحليل.
في البروتوكول التالي ، سنقوم بعزل الخلايا الجذعية السرطانية عن أورام البنكرياس.
- لعزل الخلايا الجذعية السرطانية من السرطان الغدي الأقنية البنكرياس في خزانة السلامة الحيوية المعقمة ، استخدم مشرطا معقما وملقطا لفرم الورم البشري في طبق استزراع 60 × 15 ملم يحتوي على مليلتر واحد من PBS المعقم ، مع إضافة ثلاثة إلى أربعة ملليلتر أخرى من PBS حسب الضرورة ، حتى يتم فصل الأنسجة تماما.
انقل تعليق الأنسجة إلى أنبوب مخروطي معقم وأضف PBS إلى الحجم النهائي البالغ خمسة ملليلتر. بعد ذلك ، قم بتجانس العينة ميكانيكيا مع جهاز الفصل ، وجهاز الطرد المركزي ، وهضم الأنسجة المتجانسة بالكولاجيناز عند 37 درجة مئوية.
بعد ساعة ، قم بالطرد المركزي للخلايا ، وقم بتعليق الحبيبات في 10 ملليلتر من الوسط الكامل. قم بتصفية تعليق الخلية من خلال مصفاة 40 ميكرومتر وقم بتدوير الخلايا مرة أخرى ، وهذه المرة قم بتعليق الحبيبات في خمسة ملليلتر من ACK.
بعد خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة ، قم بإزالة المخزن المؤقت لتحلل خلايا الدم الحمراء عن طريق الطرد المركزي وأعد تعليق الحبيبات في وسط الخلايا الجذعية السرطانية. بعد ذلك ، قم باحتضان الخلايا على طبق مغطى بالجيلاتين عند 37 درجة مئوية لإزالة معظم خلايا الخلايا الليفية سريعة الارتباط. بعد ساعة واحدة ، استرجع المادة الطافية وحدد عدد خلايا سرطان البنكرياس القابلة للحياة.