مقايسة تكوين الكرة: طريقة في المختبر لتحديد الخلايا الجذعية لسرطان البنكرياس وعلاجات الفحص

- يحتوي السرطان الغدي الأقنوي البنكرياس (PDAC) على مجموعة فرعية من الخلايا الجذعية السرطانية السرطانية السرطانية المنشأة للأورام حصريا (CSC). الخلايا الجذعية السرطانية متجددة ذاتيا ومتعددة القدرات وقادرة على تكوين الأورام. إنها تعبر عن البروتينات المضادة لموت الخلايا المبرمج وتحتوي أيضا على جينات مقاومة للأدوية المتعددة ، مما يجعلها مقاومة للعلاج الكيميائي. لتحديد الخلايا الجذعية السرطانية ودراسة تأثير الأدوية عليها ، نقوم بإجراء فحص تكوين الكرة.

أولا ، قم بتعليق الخلايا الجذعية السرطانية المستخرجة في وسط زراعة الخلايا المطلوب. بعد ذلك ، قم بزرع معلق الخلية في صفيحة متعددة الآبار واحتضانها للمدة المطلوبة. أضف الكمية المطلوبة من الدواء ذي الأهمية إلى عدد قليل من الآبار والدواء الوهمي في الآبار الأخرى كتحكم سلبي. احتضان الخلايا للمدة المطلوبة. تشكل الخلايا الجذعية السرطانية مستعمرات على شكل كرة تحت بيئة مزرعة غير ملتصقة.

بعد الحضانة، ضع الماصة كمية صغيرة من تعليق الخلية على مقياس كثافة الدم وضعها في عداد خلوي آلي. الآن ، احسب عدد الكرات المتكونة. عادة ما تظهر الخلايا المعالجة بالأدوية انخفاضا كبيرا في حجم وعدد المجالات. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء اختبار تكوين الكرة لتحديد الخلايا الجذعية لسرطان البنكرياس وتقييم تأثير الميتفورمين.

- لتسهيل تكوين مجال الورم لتخصيب الخلايا الجذعية السرطانية ، قم بتخفيف الخلايا بالحجم المناسب من وسط الخلايا الجذعية السرطانية إلى تركيز نهائي 2 مرات 10 إلى 3 خلايا لكل مليلتر ، وقم بتبريدها على الجليد لبضع دقائق. بعد ذلك ، بعد إضافة 500 ميكرولتر من PBS إلى الصفين الأول والأخير من 24 لوحة خلية مرفقة منخفضة للغاية ، أعد تعليق الخلايا عن طريق الماصة وبذرة 1 مليلتر من الخلايا لكل بئر في الآبار الفارغة للوحة.

يعالج أربعة آبار الخلايا مع المخدرات من فائدة وعلى الأقل أربعة سلبية تحكم آبار مع مركبة. ثم احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة أسبوع واحد. كل يومين ، أضف معالجة جديدة أو مركبة إلى كل بئر.

في اليوم 5 أو 7 ، قم بتقييم عدد مجالات الورم المشكلة باستخدام عداد الخلايا الآلي الذي يسمح بتحديد الهياكل الأكبر. للمرور التسلسلي لكرات الورم ، في اليوم 7 ، استخدم مصفاة خلية 40 ميكرومتر لحصاد الكرات. بعد ذلك ، قم بتدوير الكرات واحتضانها في 1 مليلتر من التربسين لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية لفصل الحبيبات في معلق أحادي الخلية. ثم قم بتوسيع الخلايا لمدة سبعة أيام أخرى ، كما هو موضح للتو.