موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:50 دقيقة • April 30th, 2023
- يتم إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في الغالب من الميتوكوندريا عندما تتسرب الإلكترونات من سلسلة نقل الإلكترون. تتحد هذه الإلكترونات مع الأكسجين الجزيئي مما يؤدي إلى ظهور أنواع مختلفة من الأكسجين التفاعلي ، أو ROS. في الخلايا السرطانية ، هناك فرط في إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية. يمكن لجزيئات ROS عالية التفاعل أن تلحق الضرر بالتأكسد بالأغشية والبروتينات والحمض النووي داخل الخلية.
تؤدي زيادة مستويات أنواع الأكسجين التفاعلية إلى إتلاف الحمض النووي مما يؤدي إلى تنشيط مسار إشارات مسرطن يسبب تطور السرطان. لذلك ، من الضروري اكتشاف مستويات أنواع الأكسجين التفاعلية التي تنتجها الخلايا السرطانية.
ابدأ بأخذ الخلايا السرطانية من سرطان القولون والمستقيم البشري في وسط مزرعة مناسب. بعد ذلك ، قم بزرع هذه الخلايا في صفيحة متعددة الآبار وأضف محلول DCFH-DA. احتضان اللوحة للمدة المطلوبة. DCFH-DA يعبر غشاء الخلية. بمجرد دخوله الخلية ، يتحول DCFH-DA إلى DCFH في وجود إنزيم إستيراز خلوي. علاوة على ذلك ، فإن أكسدة DCFH بواسطة أنواع الأكسجين التفاعلية تنتج جزيئات فلورية خضراء.
راقب الخلايا تحت المجهر الفلوري. تشير شدة التألق الأخضر إلى مستوى أنواع الأكسجين التفاعلية في الخلية. في البروتوكول التالي ، نستخدم صبغة DCFH-DA لتلطيخ أنواع الأكسجين التفاعلية في خلايا سرطان القولون والمستقيم.
- لتلطيخ الخلايا ، قم
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية