موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:19 دقيقة • April 30th, 2023
- توفر الغدد الليمفاوية ، أو LNs ، بيئة مكروية لنمو الورم بسبب الخلايا اللحمية الموجودة في LNs. الخلايا المتغصنة المسامية ، أو FDCs ، هي أكثر أنواع الخلايا اللحمية وفرة التي تطلق الكيموكينات والسيتوكينات وعوامل النمو ، والتي تتفاعل مع الخلايا الجذعية لسرطان القولون والمستقيم وتزيد من نمو الورم.
تعززFDCs أيضا ورم خبيث خارجي لسرطان القولون والمستقيم إلى أعضاء مثل الرئتين والكبد. لدراسة تطور سرطان القولون والمستقيم ، نقوم بزرع خلايا سرطانية مشتقة من الورم في العضو ، والتي تتطابق مع النمط النسيجي للورم في نموذج فأر يعاني من نقص المناعة يعرف باسم الطعم الغري التقويمي المشتق من المريض ، أو PDOX.
ابدأ بتثبيت فأر مخدر في وضع ضعيف على لوح تشريح باستخدام شريط مختبر. الآن ، امزج الكمية المطلوبة من خلايا سرطان القولون والمستقيم الموسومة بعلامة لوسيفيراز و FDCs في أنبوب. خذ التعليق الناتج في حقنة. بعد ذلك ، حدد موقع الفتحة الشرجية للفأر وحقن مزيج سرطان القولون والمستقيم المحضر في الطبقة تحت المخاطية من المستقيم.
لمراقبة العبء النقيلي ، قم بحقن اللوسيفيرين داخل الصفاق كل أسبوع وقم بتصوير الفأر باستخدام التصوير الحيوي. في وجود إنزيم لوسيفيراز و ATP ، يتحول اللوسيفيرين في الخلايا السرطانية إلى أوكسيلوسيفيرين ، مما ينبعث منه ضوء أزرق وأخضر. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإنشاء نموذج فأر تقويم العظام لدراسة تطور سرطان القولون والمستقيم.
- لإنشاء نموذج فأر CRC ، ضع فأر NOD SCID مخدر يبلغ من العمر ستة إلى ثمانية أسابيع في وضع ضعيف تحت مجهر تشريح ، وقم بتأمين الخطم بمخروط أنف الأيزوفلوران والأطراف الأمامية بشريط لاصق لتحقيق الاستقرار. ضع جسما صغيرا ، مثل قسم شاش صغير ، أسفل قاعدة الذيل ، مع رفع فتحة الشرج لتحسين الرؤية والزاوية. استخدم ملقطا منحنيا ومشحما وحادا لتوسيع القناة الشرجية وفضح الغشاء المخاطي الشرجي والمستقيمي البعيد وإزالة البراز.
قم بتوصيل إبرة معقمة قابلة للإزالة قياس 30 بحقنة زجاجية سعة 50 ميكرولتر. اسحب 10 ميكرولترات من الورم وتعليق خلايا هونج كونج المحضرة في الخطوات السابقة في المحقنة. حقن 10 ميكرولتر في تحت الغشاء المخاطي الخلفي للمستقيم ، من 1 إلى 2 ملم فوق القناة الشرجية ، مع التأكد من عدم المرور إلى تجويف الحوض. أخيرا ، قم بإزالة الفأر من مخروط أنف الأيزوفلوران وراقبه لمدة ساعة واحدة بعد الإجراء بحثا عن علامات الضيق.