موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:55 دقيقة • April 30th, 2023
- العضيات عبارة عن تركيبات خلوية ثلاثية الأبعاد في المختبر تنظم ذاتيا لتقليد خصائص الأنسجة الرئيسية لعضوها الأصلي. لبدء وضع العلامات ، عالج العضيات المحصودة بكوكتيل إنزيم محلل للبروتين وتحليل الكولاجينات لفصل الخلايا في تعليق. جهاز طرد مركزي لفصل الخلايا عن المادة الطافية المحتوية على الإنزيم. تخلص من المادة الطافية. قم بإذابة حبيبات الخلية باستخدام وسيط يحتوي على نواقل الفيروسات العدسية. تحمل هذه الفيروسات المؤتلفة تسلسل الترميز لبروتين الفلورسنت الأخضر أو GFP.
تندمج الفيروسات مع الخلايا وتطلق مادتها الوراثية وبعض الإنزيمات الفيروسية في السيتوبلازم. يصنع النسخ العكسي الفيروسي الحمض النووي الفيروسي التكميلي الذي ينتقل إلى نواة المضيف. يساعد التكاملات الفيروسية على دمج الحمض النووي الفيروسي المحتوي على تسلسل GFP في جينوم المضيف. قم بزراعة هذه الخلايا المنقولة في مصفوفة خارج الخلية أو صفيحة ثقافة مطلية ب ECM. استنشق الوسط وجهاز الطرد المركزي لجمع أي خلايا غير متصلة. أعد تعليق الخلايا في ECM إضافية.
تراكب التعليق على الثقافة الملتصقة لتعزيز صلاحية الخلية. بمجرد أن تصلب المصفوفة ، أضف وسيط الاستزراع واحتضانه لتسهيل تكوين العضوية. راقب الثقافة تحت المجهر الفلوري. تقوم الخلايا المنقولة بتصنيع البروتينات الفلورية الخضراء. تظهر العضيات المتكونة من هذه الخلايا إيجابية GFP. يوضح البروتوكول ا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية