موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 2:57 دقيقة • April 30th, 2023
- ابدأ بثقافة بروتين الفلورسنت الأخضر ، أو GFP ، التي تعبر عن عضيات سرطان القولون والمستقيم. حصاد العضيات. عالج بمحلول إنزيم انفصال الخلية لفصل العضيات في معلق أحادي الخلية. جهاز طرد مركزي لفصل المادة الطافية المحتوية على الإنزيم. قم بإزالة المادة الطافية. أعد تعليق خلايا سرطان القولون والمستقيم التي تعبر عن GFP باستخدام وسائط اصطناعية تحتوي على مصفوفة خارج الخلية. قم بتحميل تعليق الخلية في حقنة واحتفظ به على الجليد لمنع تصلب المصفوفة في درجات الحرارة المحيطة.
بعد ذلك ، قم بإعداد فأر مخدر في وضع ضعيف. اسحب الطبقة المخاطية من المستقيم برفق من خلال فتحة الشرج. الآن ، قم بحقن معلق الخلايا السرطانية المحضر الذي يعبر عن GFP في الطبقة تحت المخاطية الشرجية التي تحتوي على شبكة الأوعية الدموية. اسمح للماوس بالتعافي.
في غضون أيام قليلة ، يتطور ورم أولي يعبر عن GFP في موقع الحقن. مع ورم خبيث تلقائي ، تنفصل هذه الخلايا السرطانية وتدخل الدورة الدموية. في النهاية ، تتسرب الخلايا إلى أعضاء بعيدة وتتكاثر لتشكيل أورام نقيلية إيجابية ل GFP. في البروتوكول التالي ، سنعرض توليد نموذج فأر ورم خبيث عفوي لسرطان القولون والمستقيم عن طريق حقن الخلايا العضوية القولون والمستقيم المعبرة عن GFP تقويميا.
- لإنشاء نموذج فأر ورم خبيث تلقائي لطعوم الورم الغريبة المشتقة من مريض CRC ، قم بفصل العضيات المسماة GFP كما هو موضح وقم بتخفيف معلقات الخلايا السرطانية المفردة عند 5 أضعاف 10 إلى الخلايا السرطانية الخمس لكل 50 ميكرولترا من PBS ، مع استكمال تركيز مصفوفة اصطناعية خارج الخلية بنسبة 50٪. قم بتحميل 50 ميكرولترا من الخلايا لكل فأر في حقنة مزودة بإبرة قياس 22 وضع الخلايا السرطانية على الجليد.
بعد ذلك ، تأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم وضع أول فأر مخدر في وضع ضعيف على مقعد المختبر. باستخدام ملاقط معقمة ، اسحب الغشاء المخاطي للمستقيم برفق من فتحة الشرج وحقن الخلايا السرطانية على الفور في تحت الغشاء المخاطي للمستقيم.