JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 3:24 د • April 30th, 2023
- النقائل الدقيقة هي مجموعة صغيرة من الخلايا السرطانية التي تتساقط من ورم أولي وتنتشر إلى أجزاء مختلفة من الجسم عن طريق الدم أو الغدد الليمفاوية. للكشف عن النقائل الدقيقة ، قم بتعليق الخلايا العضوية لسرطان القولون والمستقيم في PBS للحفاظ على درجة الحموضة وتحميل تعليق الخلية في حقنة. بعد ذلك ، ضع فأر مخدر في وضع الانبطاح على سرير الجراحة. قم بعمل شق صغير باستخدام مقص في الجزء السفلي من الجناح الأيسر وفضح الطحال. اسحب الطحال برفق باستخدام الملقط وقم بحقن معلق الخلية ببطء في الطحال. أغلق الشق باستخدام الغرز وأعد إلى قفصه. راقبه حتى يتعافى.
بعد فترة الحقن المطلوبة ، ضحي بالفأر لتشريح الأورام الأولية والأنسجة المختلفة. راقب الأنسجة المقطوعة تحت المجهر الفلوري. تطور الخلايا السرطانية التي تعبر عن GFP ورما أوليا في الموقع المحقون في الطحال. تنتقل بعض الخلايا السرطانية من الورم الأولي إلى عضو مختلف ، عادة الكبد ، لتشكيل مستعمرات نقيلية دقيقة. في البروتوكول التالي ، سننشئ نموذجا تجريبيا للفأر النقائل للخلايا العضوية لسرطان القولون والمستقيم التي تعبر عن GFP.
- لإنشاء نموذج خبيث تجريبي لطعوم الورم الغريبة المشتقة من مريض CRC ، قم بتخفيف معلقات الخلايا السرطانية المفردة عند 4 أضعاف 10 إلى الخلايا الرابعة لكل تركيز 50 ميكرولتر وتحميل 50 ميكرولترا من الخلايا لكل فأر في حقنة مجهزة بإبرة قياس 22. ضع أول فأر مخدر في وضع الانبطاح على المقعد وقم بعمل شق صغير في المنطقة السفلية من الجانب الأيسر.
استخدم مقصا وملاقط معقمة لقطع الصفاق بعناية وفضح الطحال ، واستخدم الملقط لالتقاط الدهون المرتبطة بالطحال. بعد ذلك ، قم بحقن 50 ميكرولترا من تعليق الخلية السرطانية ببطء في الطحال ، مع الحرص على عدم ملاحظة أي تسرب.
بعد حقنجميع الفئران وخياطتها حسب الضرورة ، أعد إلى أقفاصها المنزلية وتحقق من تسرب الخيط وقابليته للحياة بعد يوم واحد من ولادة الخلايا السرطانية. استخدم الفرجار لقياس الأورام أسبوعيا ، وحصاد الأورام الأولية والأنسجة ذات الصلة حتى نقاط النهاية التجريبية المناسبة. انقل الأورام والأعضاء التي تم تشريحها إلى 5 ملليلتر من PBS المثلج في طبق بتري بطول 10 سم على الجليد وراقب الأنسجة التي تم تشريحها تحت مجهر فلوري مجسم لتقييم تعبير GFP الخاص بها.