عدوى الغدة الغدية المقطعية: تقنية لتوليد سرطان القولون والمستقيم المعزول باستخدام نماذج الفئران المعدلة وراثيا

- ابدأ بأخذ فأر متحور مشروط مخدر مع جينوم معدل يحمل تسلسلات محددة للتعرف على إنزيم Cre-recombinase تسمى إدخالات LoxP التي تحيط بالجين المثبط للورم المطلوب ليتم تحوره. كشف تجويف البطن جراحيا. حدد موقع القولون البعيد وقم بتثبيت الجزء العلوي منه. أدخل أنبوبا طبيا عبر الشرج ودفعه إلى القولون البعيد. اغسل القولون بالمحلول الملحي لإزالة أي براز. استبدل الأنبوب. مشبك المنطقة السفلية من القولون للتجزئة. قم بتضخيم الجزء باستخدام محلول مناسب لتفكك الخلية. هذا يثقب الحاجز المخاطي ويزيد من إمكانية الوصول إلى خلايا التشفير المعوية. اغسل محلول التفكك.

بعد ذلك ، قم بحقن معلق غدي في جزء القولون. تقوم هذه النواقل الفيروسية المهندسة بتشفير إنزيمات Cre-recombinase. يدخل الفيروس إلى الخلية ، ويطلق الحمض النووي الخاص به في النواة ، ويعبر عن الإنزيمات. تتعرف البروتينات على إدخالات LoxP في جينوم المضيف وتحفز إعادة التركيب الخاصة بالموقع ، وبالتالي تعطيل الجين المثبط للورم. يؤدي فقدان الطفرة الوظيفية هذا إلى تعزيز تطور السرطان. خياطة الشق والسماح للفأر بالتعافي. مراقبة لمراقبة نمو أورام القولون والمستقيم المعزولة. يوضح البروتوكول التالي إنشاء نموذج فأر سرطان القولون والمستقيم عن طريق عدوى الغدة الغدية المقطعية.

- ابدأ بوضع فأر مخدر في وضع الاستلقاء ووضع المرهم على عيون. قم بلصق الماوس في وضع آمن ثم تأكد من المستوى المناسب من التخدير عن طريق قرص إصبع القدم. قم بعمل شق خط الوسط بطول 15 ملم تقريبا في جلد أسفل البطن. بعد ذلك ، استخدم الملقط لإمساك عضلات جدار البطن ، وشق العضلات بعناية بالمقص لفتح تجويف البطن. بعد تحديد القولون البعيد ، قم بإمساك الأنسجة بعناية بمشبك دقيق على بعد حوالي 15 ملم بالقرب من فتحة الشرج.

بعد ذلك ، أدخل أنبوب تفلون مرن عبر الشرج ، وقم بدفع الأنبوب بعناية حتى يصل إلى الانسداد اللمعي وقم بتقشير الأنبوب بقنية قياس 30. قم بتوصيل حقنة قياسية سعة 1 ملليلتر بالقنية واغسل القولون بعدة ملليلتر من المحلول الملحي العادي حتى يتم إخلاء كل البراز. بمجرد أن يصبح القولون البعيد فارغا ، استبدل الأنبوب الملحي بأنبوب تفلون جديد واستخدم مشبوقا ثانيا لسد القولون على بعد حوالي 3 ملليمترات من المشبك الأول.

باستخدام حقنة ثانية سعة 1 مليلتر مزودة بقنية قياس 30 ، قم بحقن 50 إلى 80 ميكرولتر من 0.25٪ Trypsin-EDTA بعناية في جزء القولون المثبت. يجب أن ينتفخ القولون بدرجة كافية لتفتيت الحاجز المخاطي دون ثقب جزء الأنسجة المثقوب. بعد 10 دقائق ، قم بإزالة المشبك البعيد. بعد ذلك ، قم بإزالة أنبوب التربسين واغسل القولون البعيد ب 500 ميكرولتر من المحلول الملحي العادي.

بعد إدخال أنبوب تفلون جديد ، قم بتثبيت القولون مرة أخرى وقم بتضخيم الأنسجة ب 50 إلى 80 ميكرولترا من محلول الفيروسات الغدية. بعد 30 دقيقة ، قم بإزالة المشابك والأنبوب وأغلق جدار البطن ب 6-0 خيوط تشغيل سريعة الامتصاص. أغلق الجلد بمشابك الجرح الجراحية ، وراقب على وسادة تسخين حتى يتعافى تماما.

لمراقبة نمو الورم عن طريق تنظير القولون ، ضع الحامل للورم المخدر في وضع ضعيف على وسادة تسخين ، وأدخل المنظار عبر الشرج في الأمعاء. قم بنفخ الهواء برفق تحت التحكم البصري لتوسيع القولون. بعد ذلك ، ادفع المنظار بعناية للأمام حتى يمكن التعرف على الآفة المخاطية في القولون البعيد ، مع حفظ كل صورة بالمنظار عند الحصول عليها للتقييم اللاحق. عندما يتم الحصول على جميع الصور ، قم بإزالة المنظار ببطء وضع الماوس على وسادة تسخين 38 درجة مئوية حتى يتعافى تماما.