موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:22 دقيقة • April 30th, 2023
- يتوجب بروتين تاو محيطيا في النواة في خلايا سرطان القولون والمستقيم ويساعد في الحفاظ على بنية النواة. في الغالب ، تعبر هذه الخلايا عن بروتين تاو مفرط الفسفرة ، مما يؤدي إلى مقاومة الأدوية. وبالتالي ، نقوم بتحليل مستويات فسفرة تاو عن طريق إجراء فحص الفوسفاتيز.
ابدأ بأخذ محللة الخلية التي تحتوي على البروتين الكلي من خلايا سرطان القولون والمستقيم البشرية في قارورتين مصنفتين على أنهما اختبار وتحكم. عالج عينة الاختبار بإنزيم الفوسفاتيز القلوي. يزيل الفوسفاتيز القلوي مجموعات الفوسفات من تاو ، بينما تحتفظ قارورة التحكم ببروتين تاو الفسفري.
بعد ذلك ، قم بتشغيل كل من العينة والتحكم في تاو على هلام بولي أكريلاميد لفصل البروتينات. يتحرك تاو الفسفوري بشكل أبطأ على الجل من بروتين تاو غير الفسفري. قم بإزالة اللطخة الكهربائية لعينة البروتين إلى غشاء مناسب وإضافة الأجسام المضادة الأولية المقابلة لكل من تاو الفسفرة والعادية.
احتضن اللطخة بين عشية وضحاها. عالج اللطخة بالجسم المضاد الثانوي المترافق مع إنزيم المراسل الذي يرتبط بمنطقة Fc من الجسم المضاد الأولي. أخيرا ، قم بتطوير اللطخة باستخدام الركيزة الكيميائية لتحديد بروتين تاو من إجمالي عينة البروتين الموجودة في اللطخة. في البروتوكول التالي ، سنوضح مقايسة الفوسفاتيز لتقييم حالة الفسفرة الإجمالية لتاو في خلايا CRC.
- بعد تحضير عينات تحتوي على 20 مي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية