موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:28 دقيقة • April 30th, 2023
- تاو هو بروتين مرتبط بالأنابيب الدقيقة يشارك في تثبيت وتجميع الأنابيب الدقيقة. تعبر العديد من الخلايا السرطانية عن بروتين تاو مفرط الفسفرة ، والذي يفشل في الحفاظ على ارتباط الأنابيب الدقيقة المنظم جيدا. لدراسة التفاعل بين بروتين تاو والأنابيب الدقيقة ، أضف محللة الخلايا السرطانية التي تحتوي على بروتين تاو ومحلول عمل الأنابيب الدقيقة في أنبوب الطرد الدقيق.
ترتبط بروتينات تاو غير الفسفرية الموجودة في محللة الخلية بالأنابيب الدقيقة. الآن ، أضف الكمية المطلوبة من المخزن المؤقت PEM في الأنبوب لتحقيق الاستقرار في نشاط التوبولين ، وهو بروتين يتبلمر في خيوط لتكوين أنابيب دقيقة. احتضان الخليط للمدة المطلوبة.
الطرد المركزي الخليط لحبيبات البروتين المرتبط بالأنابيب الدقيقة. يبقى البروتين غير المرتبط في المادة الطافية. انقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد ، وأعد تعليق الحبيبات في مخزن مؤقت مناسب. أضف عازلة تحميل هلام إلى تعليق الحبيبات المعاد تعليقه وقم بتشغيل العينات على هلام بولي أكريلاميد لفصل البروتين المرتبط بالأنابيب الدقيقة واللطخة الكهربائية على غشاء مناسب.
أضف أجساما مضادة مناسبة وقم بتطوير اللطخة باستخدام ركيزة التلألؤ الكيميائي لتحديد بروتينات تاو المرتبطة. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء مقايسة ربط الأنابيب الدقيقة لتحديد البروتينات المرتبطة بالأنابيب الدقيقة.
- بعد تحضير عينات
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية