$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
- النماذج العضوية ثلاثية الأبعاد لسرطان القولون والمستقيم هي ثقافات في المختبر مصممة لتقليد البيئات المكروية للورم في الجسم الحي. غالبا ما تحتوي المزرعة على خلايا لحمية ، مثل الخلايا الليفية ، المزروعة بشكل مشترك مع الخلايا الظهارية لسرطان القولون والمستقيم ، في بيئة مكروية مصفوفة خارج الخلية مناسبة.
في الثقافات القائمة ، تغزو الخلايا السرطانية ذات الإمكانات النقيلية المصفوفة خارج الخلية. لعزل هذه الخلايا الغازية ، أولا ، عالج النموذج العضوي بالفورمالديهايد لإصلاح الخلايا والمصفوفة خارج الخلية. احتضان بالكحول لتجفيف العينة.
بعد ذلك ، قم بتضمينه في شمع البارافين السائل لتوليد كتلة الأنسجة. استخدم ميكروتوم فائق الصغر للحصول على أقسام مقطعة إلى شرائح رفيعة. قم بتركيب الأقسام على شريحة زجاجية مناسبة.
أضف الزيلين لإزالة الأقسام من الأقسام. بالتتابع ، احتضان الأقسام بتركيزات متناقصة من الإيثانول لإعادة ترطيب العينات.
عالج باستخدام Cresyl Violet لتلطيخ الخلايا السرطانية والمستقيمية وتمييزها عن البيئة الدقيقة. ضع شريحة الزجاج الملون ووجهها لأسفل على مرحلة المجهر. باستخدام البرامج المناسبة ، حدد الخلايا المراد تشريحها المجهرية وحدد الحدود. أطلق الليزر لقطع القسم المميز وجمع الجزء التشريح المجهري.
في البروتوكول التالي ، سنعرض عزل خلايا سرطان القولون والمستقيم عن نموذج الزراعة العضوية المشتركة ثلاثية الأبعاد عن طريق التشريح المجهري بالليزر.
- قم بإزالة الطابعة العضوية بالكامل ، بما في ذلك لوح النايلون ، من البئر وضعها على غلاف بلاستيكي. قم بتقسيم صفيحة النمط العضوي والنايلون باستخدام مشرط نظيف يمكن التخلص منه وقم بتثبيت كلا النصفين في الفورمالديهايد لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة. استبدل الفورمالديهايد بنسبة 70٪ من الإيثانول بعد 24 ساعة واتركه طوال الليل قبل تضمينه في البارافين والتقطيع والتلطيخ.
لإجراء التشريح المجهري بالليزر ، قم أولا بتقسيم النمط العضوي بسمك 10 ميكرون على شرائح مثبتة على الغشاء. بعد معالجة الأقسام كما هو موضح في بروتوكول النص ، استعد لإجراء التشريح الدقيق بالليزر باستخدام النظام الأساسي المختار.
ضع الشريحة الزجاجية مع القسم الملون لتشريح مجهري ووجهه لأسفل على مرحلة المجهر. قم بتركيب أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 0.5 مل في كاسيت التجميع وأضف 50 ميكرولترا من المخزن المؤقت لتحلل الخلايا إلى الغطاء الذي ستتجمع فيه الأنسجة التشريح المجهري. تحت الرؤية المباشرة ، استخدم عصا التحكم لتحديد الأنسجة ذات الأهمية ، وباستخدام واجهة البرنامج ، قم بالتعليق على القسم العضوي الملون ، وتسليط الضوء على الخلايا المراد تشريحها بشكل دقيق في جبهة غزو الورم.
اطلب من الليزر إطلاق النار ، والذي يجب أن يقطع القسم المميز ويدفع الأنسجة التي تم تشريحها إلى غطاء أنبوب الطرد المركزي الدقيق. تابع معالجة العينات بطريقة مناسبة لاستخراج المادة التحليلية ذات الاهتمام.