موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 2:44 دقيقة • April 30th, 2023
- تولد الخلايا قوى ميكانيكية تعمل على مصفوفة خارج الخلية. هذه القوة تسمى قوة الجر. تمارس الخلايا قوى جر لأداء مهام مختلفة مثل الهجرة والانتشار.
تمارس الخلايا السرطانية النقيلية قوى جر أكبر من الخلايا السليمة ؛ لذلك ، نقوم بإجراء اختبار القياس الخلوي للجر لقياس قوى الجر التي تمارسها الخلايا على ركائز مرنة. ابدأ بزرع الكمية المطلوبة من خلايا سرطان القولون على هيدروجيل بولي أكريلاميد ، وهو هلام يحاكي ECM في المختبر. يتكون الجل من بروتينات الفيبرونيكتين ، التي تساعد الخلايا على الالتصاق بالسطح ، وخرز الفلورسنت ، والتي تعمل كعلامة للتغيرات الموضعية.
احتضان الخلايا للفترة المطلوبة. تلتصق الخلايا بالهلام وتمارس قوة الجر ، مما يؤدي إلى إزاحة حبات الفلورسنت. الآن ، ضع اللوحة تحت مجهر الفلورسنت والتقط صورة لخرز الفلورسنت النازح. بعد ذلك ، أضف الكمية المطلوبة من التربسين إلى اللوحة لفصل الخلايا وتحليل قوة الجر التي تمارسها الخلايا باستخدام البرنامج المناسب. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء فحص مجهري لقوة الجر لتحليل الجر الخلوي لخلايا سرطان القولون البشري.
- لإجراء فحص الفحص المجهري لقوة الجر ، قم أولا بتسخين محلول 0.25٪ trypsin-EDTA 10٪ SDS إلى 37 درجة مئوية في حمام مائي لمدة 10 دقائق قبل بدء تجربة الجر. قم بإزالة هلام واحد في كل مرة من حاضنة زراعة الخلايا وضعها على مرحلة المجهر. بعد العثور على خلية واحدة في مجال الرؤية ، قم بإزالة غطاء طبق بتري والتقط صورة تباين طور للخلية.
بعد ذلك ، قم بتبديل وضع التصوير إلى التألق وحدد المرشح المناسب. لا تحرك مرحلة المجهر أو العينة خلال هذا الوقت. بعد ذلك ، التقط صورة للحبات الفلورية التي تم إزاحتها بواسطة الجر الخلوي. الآن ، أضف 1 مليلتر من محلول Trypsin SDS إلى طبق Petri لفصل الخلية عن الجل. التقط صورة مرجعية للخرز بعد إزالة الخلية.