JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 4:23 د • April 30th, 2023
- يتم تنشيط الخلايا الجذعية للخلايا الصباغية الهادئة ، استجابة للأشعة فوق البنفسجية أو إزالة الشعر من الشعر. يمكن أن تؤدي الخلايا الجذعية للورم الميلانيني المنشط إلى الورم الميلانيني الجلدي - وهو شكل من أشكال سرطان الجلد. لدراسة الورم الميلانيني ، نقوم بإعداد كتل أنسجة الجلد المجمدة للاحتفاظ بالهياكل الأصلية للحمض النووي والبروتينات أثناء إجراء التثبيت.
ابدأ بوضع فأر الورم الميلانيني القتل الرحيم على سرير جراحي وإزالة الشعر من المنطقة الظهرية من الجلد فوق الذيل. استئصال الجلد وقم بتغطيته بورق ترشيح. بعد ذلك ، اغمر ورق الترشيح الذي يحتوي على أنسجة الجلد في الفورمالين المحايد المؤقت للوقت المطلوب. يخترق الفورمالين أنسجة الجلد ويرتبط بالأحماض الأمينية ، مما يؤدي إلى الارتباط المتقاطع للبروتينات ، مما يؤدي إلى تثبيت الأنسجة.
قم بإزالة أنسجة الجلد من الورق وقطع المنديل للحصول على قطع بالحجم المطلوب. الآن ، قم بتضمين قطع المناديل عموديا في CRYOOLD مملوء بوسط OCT وضع قوالب التبريد على الثلج الجاف. OCT عبارة عن مصفوفة عينة تتصلب عند التجميد وتشكل طبقة هلامية حول عينة الأنسجة التي تثبتها في مكانها. استخدم الكتل المجمدة لمزيد من المقايسات النسيجية. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإعداد كتل أنسجة الجلد المجمدة من الجلد الظهري للفئران لدراسة الورم الميلانيني الجلدي.
- لعزل عينات الجلد ، استخدم أداة تشذيب كهربائية لإزالة أي شعر من منطقة الجلد الظهرية للفئران المعرضة للإشعاع الرحيم وقم بتنظيف الجلد المكشوف برفق بمنديل خال من النسالة لتنظيف المنطقة. قم بعمل شق صغير بمقص حاد فوق قاعدة الذيل مباشرة وأدخل مقصا حادا كبيرا في الشق لفصل الأنسجة الضامة تحت الجلد. باستخدام مقص حاد ، قم بقص بعناية على طول حافة منطقة الجلد محل الاهتمام لعزل عينة الأنسجة ، ووضع أنسجة الجلد المستقطعة على منشفة ورقية نظيفة.
بعد ذلك ، استخدم ملقطا باهتا لتمديد الجلد بحيث يلتصق بالمنشفة ويكون مشدودا. عندما يتم حصاد جميع العينات ، ضع عينة الجلد ودعامة المناديل الورقية في قطعة من ورق الترشيح المطوي بجوار التجعد مباشرة ، مع الحرص على أن تكون العينة ناعمة وغير مطوية أو مجعدة. أغلق جوانب ورق الترشيح بدبابيس وقم بقص الورق. بعد ذلك ، اغمر العينات بالكامل في الفورمالين المحايد بنسبة 10٪ لمدة 3 إلى 5 ساعات في درجة حرارة الغرفة قبل غسل المناديل بغسلتين لمدة 5 دقائق في ماء منزوع الأيونات.
بعد الغسيل الثاني ، قم بإزالة أي مادة متبقية بعناية من أنسجة الجلد وقم بقص حواف العينة حتى لا تكون خشنة. بعد ذلك ، قم بعمل ثلاث قطع سهمية في كل عينة بحيث لا يزيد عرض الشرائط عن 5 ملليمترات وقم بعمل قطع عرضية بحيث لا يزيد عرض العينات عن 20 ملم. ضع جهاز التبريد الذي يحتوي على درجة حرارة القطع المثلى أو وسيط OCT في اتجاه عمودي وضع أربع إلى خمس قطع من الجلد فوق OCT.
عندما تكون جميع القطع في مكانها ، استخدم زوجين من الملقط الدقيق لإحضار الحافة الطويلة لكل قطعة من الجلد إلى أسفل التبريد بحيث تكون العينات عمودية داخل OCT وعمودية على قاعدة القالب. بعد ذلك ، املأ القالب ب OCT إضافي إلى الشفة الثانية ، وضع القالب على سطح مستو من قطعة من الثلج الجاف ، باستخدام ملقط لضبط أي قطع جلدية قد تكون قد تحولت أثناء النقل حيث تبدأ الكتلة في التجمد حسب الضرورة.