نمذجة الطعم الغريب المشتق من المريض: تقنية لتوليد نماذج فأر الورم الميلانيني

- في نماذج xenograft أو PDX المشتقة من المريض ، يتم زرع الخلايا السرطانية أو شظايا المرضى البشريين في الفئران المتلقية التي تعاني من نقص المناعة. تحاكي نماذج PDX الخصائص البيولوجية والجزيئية للبيئة المكروية للورم البشري. لتطوير نموذج PDX للورم الميلانيني ، أولا ، حصاد أنسجة الورم من مريض الورم الميلانيني. إزالة الأنسجة النخرية من الورم. افرم الورم للحصول على ملاط. بعد ذلك ، قم بإعداد فأر متلقي مخدر في وضع الانبطاح. قم بعمل شق جراحي صغير على الجلد الظهري. قم بقطع الغشاء اللفافي برفق أو طبقة النسيج الضام الرخو تحت الجلد مباشرة. هذا يفصل الجلد عن طبقات العضلات الأساسية ويساعد على إنشاء جيب لزرع الورم.

انقل ملاط الورم برفق إلى الجيب. الآن ، قم بإدارة مصفوفة اصطناعية خارج الخلية في الجيب لتثبيت الخلايا السرطانية المزروعة وتأمينها. قم بتدبيس الجرح جراحيا والسماح للفأر بالتعافي. راقب الفأر المتلقي أسبوعيا لمراقبة نمو ورم الطعم الغريب. في البروتوكول التالي ، سنوضح الزرع تحت الجلد لخلايا ورم الورم الميلانيني المشتق من المريض في فأر NSG يعاني من نقص المناعة لتوليد نماذج xenograft مشتقة من الورم الميلانيني من المريض.

- لزرع الاستئصال الجراحي أو أنسجة الخزعة الجراحية ، أولا ، حلق الشعر من أسفل ظهر NSG للفئران المخدرة التي يبلغ عمرها ستة إلى ثمانية أسابيع تاركا مساحة من 1.5 سم إلى 3 سم تقريبا بدون شعر. قم بإعداد قطع الورم وقسم ملاط الورم في طبق بتري إلى أكوام فردية للزرع الجراحي. باستخدام شفرة مشرط ، قم بعمل شق بطول 5 مم تقريبا في منتصف الجزء الخلفي من الماوس. باستخدام زوج واحد من الملقط ، ارفع الجلد على جانب الشق المقابل للمشغل. باستخدام المقص في الناحية الأخرى ، افصل الجلد عن طبقة العضلات عن طريق قطع الغشاء اللفافي برفق بقطع مقصية صغيرة ، وبالتالي إنشاء جيب لأنسجة الورم.

استخدم شفرة مشرط لالتقاط قطعة واحدة من الورم بالإضافة إلى كومة فردية واحدة من أنسجة ملاط الورم ووضع الأنسجة برفق في الجيب الذي تم إنشاؤه. ثم أضف 100 ميكرولتر من المصفوفة الاصطناعية خارج الخلية على كومة أنسجة الورم في الجيب. باستخدام زوجين من الملقط ، اسحب الشق على كلا الطرفين حتى تقترب حواف الجرح من بعضها البعض. ثم ضع مشبك أو اثنين من مشبك الجرح لإغلاق الجرح. حقن تحت الجلد 1-5 ملليغرام لكل كيلوغرام من المسكنات. عند اكتمال الشفاء ، بعد حوالي 7 أيام ، قم بإزالة مشابك الجرح.