موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:52 دقيقة • April 30th, 2023
- تساعد نماذج ورم خبيث التجريبية في تقييم قدرة الخلايا السرطانية على التسرب والتكاثر في مواقع معينة بعد الحقن داخل الأوعية الدموية. للبدء ، قم بإعداد معلق أحادي الخلية لخلايا الورم الميلانيني بالتركيز المطلوب باستخدام وسيط مناسب. قم بتحميل التعليق في حقنة.
بعد ذلك ، قم بتقييد الماوس في الغرفة وتأمينها بحيث يمكن الوصول إلى ذيله. قم بتدوير الماوس 90 درجة لتصور الوريد الجانبي. استخدم مصباحا حراريا لزيادة درجة الحرارة المحيطة لتوسيع الوريد الذيل. الآن ، أدخل الإبرة باتجاه الطرف البعيد من الذيل وحقن معلق خلية الورم الميلانيني المحضر في الوريد المتوسع.
تهاجر الخلايا السرطانية النقيلية المحقونة عبر الدورة الدموية. في النهاية ، تنتشر بعض هذه الخلايا من الدورة الدموية إلى أعضاء بعيدة مثل الرئتين. تتكيف هذه الخلايا السرطانية مع بيئتها المكروية الجديدة لتتكاثر وإنشاء بؤر نقيلية تجريبية.
في البروتوكول التالي ، سنوضح حقن وريد الذيل لخلايا الورم الميلانيني B16-BL6 في نموذج فأر لدراسة إمكاناتها النقيلية.
- بعد إعداد جميع معلقات الخلايا B16-BL6 ، حدد الماوس. أمسكها من الذيل ، وقم بتوجيه ، الخلفي أولا ، إلى مقيدة. عندما يكون جذع الفأر في الغرفة الرئيسية وذيله خارج الجهاز ، استمر في سحب باتجاه نهاية التقييد.
بعد ذلك ، أدخل المكبس التقييدي واستمر في الضغط على المكبس حتى يصبح الماوس آمنا. بمجرد وضع في مكانه ، قم بتدوير الماوس 90 درجة بحيث يكون أحد عروق الذيل الجانبية متجها لأعلى. بعد ذلك ، استخدم وسادة كحولية لتنظيف جانب ذيل الماوس بقوة حيث يكون الوريد أكثر وضوحا.
للتحضير للحقن ، أولا ، اجمع 300 ميكرولتر من 0.5 مليون خلية لكل مليلتر معلق في حقنة. بعد ذلك ، قم بإخراج الفقاعات من المحقنة عن طريق قلبها ، ونفض الغبار على جانبها ، ودفع المكبس. بمجرد إزالة الفقاعات ، أخرج مزرعة الخلية لإنتاج حجم نهائي يبلغ 250 ميكرولتر في المحقنة.
تابع تمديد ذيل الماوس باليد غير المهيمنة. امسكها بحيث ترفع السبابة الطرف القريب من الذيل ويضغط الإبهام على الجزء البعيد. باليد المهيمنة ، أدخل الإبرة في الوريد باتجاه الطرف البعيد من الذيل ، بزاوية دقيقة لأسفل. ثم أدخل الإبرة أكثر ، واضبطها بحيث تتطابق مع زاوية الوريد الذيل.
بعد إدخال الإبرة ، حوالي 1 سم في وريد الذيل ، ابدأ في دفع المكبس أثناء تثبيت المحقنة. أوقف أي نزيف عن طريق تثبيت الشاش على موقع الدخول. بمجرد إخراج معلق الخلية ، قم بإزالة الإبرة من الوريد وتخلص منها. بعد ذلك ، قم بإزالة المكبس من التقييد وضع الماوس في قفص المستلم.