أسماك HCR-DNA: تقنية تهجين مضان في الموقع للكشف عن الحمض النووي الفيروسي في الخلايا المصابة
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 6:00 دقيقة • April 30th, 2023
- يكتشف HCR-FISH ، أو تفاعل التهجين المتسلسل - التألق في الموقع ، تسلسلات الحمض النووي الفيروسي داخل جينوم الخلايا المصابة بالفيروس. للبدء ، قم بإصلاح ثقافة ملتصقة للخلايا المصابة بالفيروس واختراق غشاء خلياها. احتضان الخلايا بمخزن مؤقت تهجين لتقليل أي إشارة في الخلفية. عالج الخلايا بمجسات بادئ تحمل تسلسل بادئ HCR وتسلسل تكميلي يستهدف الحمض النووي الفيروسي. قم بتسخين العينة لتشويه طبيعة الحمض النووي المضيف مزدوج الشريطة إلى الحمض النووي أحادي الشريطة. احتضان العينة للسماح للمسبار بالارتباط بتسلسل الحمض النووي الفيروسي المستهدف التكميلي.
بعد ذلك ، عالج بمخزن مؤقت للتضخيم يحتوي على مجموعتين من مجسات دبوس شعر قليل النوكليوتيدات المسمى بالفلورسنت ، H1 و H2. احتضان لتسهيل تفاعل سلسلة التهجين. يرتبط تسلسل البادئ غير المزاوج بذيله H1 التكميلي ، مما يضفي خطية على بنية دبوس الشعر. يرتبط تسلسل H1 المكشوف بالمثل بذيله H2 التكميلي. يستمر H2 الزائدة في الارتباط بذيل H1. بهذه الطريقة ، تتضخم المجسات ذات العلامات الفلورية حول الموقع المستهدف ، مما ينبعث منها إشارة قوية. عالج العينة باستخدام DAPI لتلطيخ نوى الخلية.
استخدم مجهر مضان للكشف عن التألق الساطع من بؤر النسخ المتماثل داخل نوى الخلايا المصابة. في البروتوكول التالي ، سنعرض أسماك HCR-DNA في الموقع للكشف عن جينوم فيروس ورم خلية ميركل في خلايا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية