تحضير فيريون فيروس ورم خلية ميركل المؤتلف (MCPyV): تقنية لإنتاج فيريون MCPyV المؤتلف عالي العيار
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:53 دقيقة • April 30th, 2023
- فيروس ورم خلية ميركل ، أو MCPyV ، هو فيروس ورم الحمض النووي مزدوج الشريطة مع جينوم دائري يسبب سرطان خلايا ميركل ، وهو نوع من سرطان الجلد. لتحضير فيروسات MCPyV ، أولا ، قم بمعالجة ثقافة ملتصقة لخلايا التعبئة بكوكتيل يحتوي على عامل تعداء ، والجينوم الفيروسي ، واثنين من البلازميدات المشفرة للبروتينات المطلوبة لتعزيز تكاثر الفيروس.
أثناء الحضانة ، يشكل كاشف التعدين lypoplexes مع البلازميدات ، مما يسهل توصيلها إلى خلايا التغليف. بمجرد دخولها إلى النواة ، تسمح آلية الخلية بالتعبير عن الجينومات الفيروسية والبلازميد. يشفر تعبير البلازميدات مستضد الورم الكبير وبروتينات المستضد الورمي الصغير. تنتقل هذه البروتينات إلى النواة وتدفع تكرار الحمض النووي الفيروسي. بعد ذلك ، يقوم الجينوم الفيروسي بتشفير بروتينات القفيصة الهيكلية. تنتقل هذه البروتينات إلى النواة وتساعد في تجميع الفيروسات المؤتلفة.
بعد ذلك ، حصاد الخلايا المستزرعة. عالجها بمحلول يحتوي على منظف و DNase. يعمل المنظف على تحلل الخلايا لإطلاق الفيروسات. يحط DNase أي حمض نووي بلازميد حر من التعليق. جهاز طرد مركزي لفصل الحطام الخلوي في الحبيبات. قم بتحميل المادة الطافية المحتوية على الفيروس في أنبوب يحمل وسط تدرج كثافة مناسب. جهاز الطرد المركزي للحصول على كسور مركزة غنية بالفيريون داخل وسط التدرج.
في البروتوكول التالي ، سنعرض تحضير فيريون
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية