مقايسة تكوين مستعمرة الخلايا الكيراتينية: اختبار في المختبر لتقييم قدرة الخلايا الكيراتينية على النمو إلى مستعمرات

- يحدد اختبار تكوين المستعمرة قدرة الخلايا الفردية على التكاثر وتشكيل المستعمرات. ابدأ بجلد الفأر الظهري المستأصل في صفيحة المزرعة. اكشط الأنسجة تحت الجلد والدهون من الجانب البطني من الجلد. عالج الأنسجة بمحلول الهضم. تعمل الإنزيمات المحللة للبروتين في المحلول على تدهور المصفوفة خارج الخلية ، مما يؤدي إلى تفكك خلايا البشرة.

اكشط طبقة البشرة برفق لتحرير الخلايا والشعر المنفصل في وسط الحصاد. قم بتصفية المعلق من خلال مصفاة مناسبة لاحتجاز الشعر أو أي حطام والحصول على تعليق أحادي الخلية لخلايا البشرة. انقل الحجم المطلوب من معلق الخلية هذا إلى صفيحة مطلية بالكولاجين تحتوي على طبقة ملتصقة من خلايا التغذية التي توقف عن النمو. مكمل بوسائط مناسبة تفضل بقاء الخلايا الكيراتينية.

أثناء الثقافة ، تلتصق الخلايا الكيراتينية بطبقة التغذية. بالإضافة إلى ذلك ، تفرز هذه الخلايا المغذية عوامل النمو وتقوم بتصنيع بروتينات المصفوفة خارج الخلية التي تدعم نمو الخلايا الكيراتينية. اعتمادا على القدرة التكاثرية للخلايا الكيراتينية الفردية ، فإنها تبدأ في تكوين مستعمرات. قم بإزالة الوسائط وإصلاح المستعمرات. تلطيخ الخلايا بصبغة مناسبة للكشف عن المستعمرات للعد. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء الفحص الاستمرابط للخلايا الكيراتينية الأولية التي تم حصادها من الفئران البالغة بعد العلاج بمركبات الاختبار.

- بعد حصاد