موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:45 دقيقة • April 30th, 2023
- عوامل النسخ هي بروتينات تحتوي على مجالات ربط الحمض النووي. ترتبط بتسلسلات محددة من الحمض النووي وتساعد في تنظيم التعبير الجيني في الخلايا. للكشف عن تعبير عامل النسخ في الخلايا الصباغية المرتبطة بالقشور ، أولا ، حصاد المقاييس الظهرية المصطبغة الداكنة من سمكة الزرد المخدرة. قم بإصلاح المقاييس ومعالجتها بمحلول نفاذية لجعل الخلايا الصباغية الفردية قابلة للنفاذ.
عالج بمحلول مبيض لإزالة حبيبات صبغة الميلانين الداكنة من الخلايا. تقضي عملية التبييض هذه على فرص إشارات الخلفية المرتبطة بالصبغة أثناء خطوات التلوين اللاحقة. احتضان بمحلول مانع يحتوي على بروتينات لمنع مواقع ربط البروتين غير المحددة على سطح الخلية.
الآن ، عالج العينة بالأجسام المضادة الأولية المطلوبة. ترتبط هذه الأجسام المضادة بعوامل النسخ المستهدفة داخل الخلايا. بعد ذلك ، قم بتسمية العينة بالأجسام المضادة الثانوية ذات العلامات الفلورية الخاصة بالأجسام المضادة الأولية. بالإضافة إلى ذلك ، عالج العينة بصبغة ربط الحمض النووي الفلورية المناسبة لتلطيخ نوى الخلية. استخدم المجهر الفلوري للكشف عن انبعاثات الفلورسنت الساطعة من مجمعات عامل النسخ والأجسام المضادة ونواة الخلية.
في البروتوكول التالي ، سنعرض التلوين المناعي للخلايا الصباغية المرتبطة بالقشور الظهرية التي تعبر عن عامل النسخ المحفز للخلايا الصباغية - A ، أو mitfa ، في سمكة الزر
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية