موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:05 دقيقة • April 30th, 2023
- لبدء الفحص ، أولا ، قم بعمل ماصة معلق خلية ليفية مكمل بحمض الأسكوربيك في صفيحة بئر واحتضانه. يزيد حمض الأسكوربيك من تكاثر الخلايا الليفية. كما أنه يحفز إفراز مكونات ECM الأصلية ، وبالتالي تضمين الخلايا المتكاثرة في المصفوفة السميكة خارج الخلية.
حرر المصفوفة برفق من سطح اللوحة واتركها تطفو في الوسائط. تتقلص المصفوفة وتصبح أكثر سمكا مع المزيد من ترسب المصفوفة وإعادة تشكيلها ، مما يؤدي إلى ظهور نسيج يشبه الأدمة الأصلية. انشر المصفوفة على شبكة مسامية. بعد ذلك ، قم بزرع الخلايا السرطانية الظهارية فوق المصفوفة واحتضانها حتى تستقر الخلايا وتلتصق.
انقل المجموعة إلى منصة متشابكة مجمعة مسبقا في طبق. أضف وسائط لتكملة الطبقة السفلية فقط من المصفوفة لإنشاء واجهة هواء سائل للخلايا أعلاه. أثناء الثقافة ، تعزز الواجهة تكاثر الخلايا السرطانية وتمايزها. تفرز الخلايا أيضا البروتياز الذي يحلل ECM ، مما يسهل هجرتها وغزوها إلى المصفوفة.
في البروتوكول التالي ، سنعرض اختبار الغزو باستخدام خلايا سرطان الخلايا الحرشفية الجلدية على مصفوفة أصلية مشتقة من الخلايا الليفية اللحمية الأولية.
- ابدأ بزرع 200,000 من الخلايا الليفية لكل بئر في ألواح مكونة من 6 آبار في وسائط الخلايا الليفية المكملة بحمض الأسكوربيك 2-الفوسفات المحضر حديثا. أعد تغذية الخلايا كل 2 إلى 3 أيام باستخدام 2 إلى 5 ملليلتر من الوسائط الطازجة.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية