كسر كاذب : والصدمات الحادة الأنسجة الطرفية النموذجي

عندما يتم كسر عظم طويل ، مثل عظم الفخذ أو الساق ، تتعرض العضلات والأنسجة الرخوة المصابة لشظايا العظام التالفة ونخاع العظام. يتبع ذلك استجابة مناعية قوية للمساعدة في إصلاح الأنسجة. يمكن إنشاء نموذج لدراسة آثار هذا التعرض عن طريق حصاد كل من عظم الفخذ والساق.

من فأر متبرع. يتم سحق العظام لإنشاء محلول عظمي ، ثم يتم حقنه في الفخذ المصاب للفأر المتلقي. ثم تتم مراقبة الاستجابات المناعية وتقييم إصابات الأعضاء البعيدة لدراسة الآثار طويلة المدى للصدمات الناجمة عن الكسر.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية لصدمة الأنسجة المحيطية ، مثل نموذج كسر عظم الفخذ الثنائي ، هي أن هذا النموذج ، نموذج الكسر الزائف ، يسمح بالبقاء على قيد الحياة على المدى الطويل دون مضاعفات التخدير المطول أو تقنيات تثبيت الكسر المعقدة ، وبالتالي يسمح بدراسة الاستجابات المناعية في المدى المتأخر بعد الصدمة. قبل البدء في الإجراء ، قم بإعداد المستلزمات التالية دلو ثلج ، وأدوات جراحية من البيتادين ، ومرقئ GREs ، ملقط هاون ومدقة ، وإبرة قياس 20 ، وحقنة CC واحدة ، وتخدير PBS ، ومخروط أنف الفلور. تطابق واحد للعمر والوزن.

يجب أن يوفر الفأر المتبرع الجيني مادة كافية لثلاثة متلقين. قم بلصق المتبرع على لوح زجاجي ، مع التأكد من لصق الأطراف السفلية فقط عند طرف القدم. حلق الأطراف السفلية بعناية.

ثم قم بتغطيتها بالكامل بالبيتادين والكحول للعقم لإزالة العظام الطويلة من الطرف السفلي ، وعمل شق جراحي في الجلد في المنطقة الأربية ، والاستمرار في قطع الجلد على طول الطرف وصولا إلى الكاحل ، وسحب الجلد وتشريحه بعيدا عن الوجه تحت الجلد والعضلات ، على حد سواء على الجوانب الإنسية والجانبية. ثم أدخل شفرة واحدة من المقص تحت العضلات الأمامية والجانبية للساق. حرك الشفرة بالقرب من العظم وبعيدا لرفع العضلات بشكل نظيف بعيدا عن العظم الأساسي.

كرر هذه التقنية على الجانب السفلي الخلفي والإنسي من الظنبوب لفصل العضلات تحت الساق. يجب استخدام الحد الأدنى من المجهود الإضافي على الجانب الخلفي عند الانزلاق بعيدا لالتقاط الشظية بعيدا عن الظنبوب في الطرف القريب من عضلات الساق هذه. قم بقص الأوتار بالقرب من إدخالها قدر الإمكان وسحب العضلات بعيدا أثناء سحب مجموعة العضلات معا بطريقة هبوطية ، ستطلق قاطرة صغيرة المرفقات البعيدة من مفصل الكاحل باستخدام مقص مقطوع من خلال مفصل الكاحل.

لا تفصل الساق عن عظم الفخذ في هذه المرحلة ، فهذا الاتصال يعطي نفوذا إضافيا يساعد في تشريح عظم الفخذ من مفصل الورك. استخدم تقنية مماثلة لتحرير العضلات من عظم الفخذ. قم بإجراء ذلك بشكل خلفي ووسطي وجانبي إذا لزم الأمر.

قم بقطع التعلق البعيد لهذه المجموعات العضلية لتحريرها من مفصل الركبة. قم بتمديد شق الجلد حسب الحاجة لتحقيق التعرض الكافي ومتابعة أسفل العضلات. لتشريح نهاية عظم الفخذ من مفصل الورك ، قم بإزالة عظم الفخذ وإرفاق الساق من الفأر المتبرع وضعها على شاش معقم.

افصل العظمتين في مفصل الركبة ببساطة عن طريق الإمساك بكل عظم بيد منفصلة ولف العظمتين برفق أو تدويرها في اتجاهين متعاكسين على طول AEs الطويلة. لإزالة ملحقات الأوتار المتبقية من العظام الطويلة ، لف قطعة من الشاش أربعة في أربعة حول طول العظم. أمسك بإحكام واكشط الطول الكامل للعظام عدة مرات لإزالة الأنسجة المتبقية من السطح.

ضع العظام المجمعة في أنبوب معقم 1.5 ملليلتر مرفوض على الجليد. انقل عظام المتبرع إلى خزانة سلامة بيولوجية مطهرة تماما. لتحضير محلول العظام.

يجب تحضير غطاء المحرك بضمادة حقل معقمة ، وملاط معقم ومدقة ، وزوج معقم من الملقط ، وأنبوب معقم سعة ثمانية مليلتر معقم PBSA واحد مخطط مع أطراف ماصة معنية. يقوم رجل ماصة سعة 100 ميكرولتر مع أطراف معنية ، ومحاقن واحدة من المليلتر ، وإبر قياس 20 باستخدام الملقط ، بنقل العظام إلى الملاط واستخدام المدقة لسحق العظام برفق. ماصة ملليلتر واحد من PBS في الملاط واستمر في سحق الأجزاء المتبقية باستخدام حركات دائرية لضمان تعليق إعادة التركيب الكامل.

ثم أضف ملليلتر آخر من PBS واستمر في التكسير لإنشاء محلول العظام ، والذي يجب أن يكون له لون وردي. اسكب المحلول ببطء من الهاون في أنبوب سعة ثمانية ملليلتر مع التأكد من بقاء أي بقايا أكبر في الخلف. انقل محلول العظام إلى حقنة سعة مليلتر واحد.

باستخدام إبرة قياس 20 ، يجب أن يظل محلول العظام على الجليد. ماصة ميكرولتر واحد من محلول العظام على لوحة Mac congar منتشرة بالتساوي على السطح. احتضن الطبق لمدة 24 إلى 48 ساعة لضمان العقم.

ابدأ العملية الجراحية لإصابة الأنسجة الرخوة وحقن محلول العظام من خلال تقييم عمق تخدير الفأر المخدر بنتا باربيتال من إصبع القدم. قرص. ضع الماوس في وضع ضعيف على لوح زجاجي وشل حركة عن طريق لف شرائح رقيقة من الجانب اللاصق بشكل غير محكم حول الجزء البعيد من كل طرف باستخدام أوسكار خمسة مقصات بشفرة مقاس 40. حلق مناطق البطن والأربية والفخذ للحيوان.

انقل الماوس إلى المجال الجراحي المعقم. امسح منطقة الجراحة بالبيتادين. ثم امسحها بالكحول لتعقيمها.

ضع مخروط أنف على الفأر يحتوي على قطعة من الشاش مع مليلتر واحد من 99٪ من الفلور. بمجرد أن يبدأ تنفس في التباطؤ ، قم بإزالة مخروط الأنف. إذا كانت هناك حاجة إلى تخدير إضافي في أي جزء من الإجراء ، فقد يتم حقن بنتوباربيتال إضافي أو إعطاء الفلور.

بعد ذلك ، قم بتضميد حقل معقم ولفه عبر الفأر للسماح بتعرض الأطراف السفلية والرأس فقط. إصابة الأنسجة الرخوة هذه هي إصابة سحق الأطراف الخلفية الثنائية. تأكد من وضع الماوس مع اختطاف الأطراف الخلفية قليلا وتدويرها بشكل جانبي.

هذا يساعد في الوصول إلى العضلات الصحيحة. قم بتجميع عضلات الركبة لأداء إصابة السحق ، قم بتثبيت مرقئ كبير بطول 18 سم حول نقطة منتصف عضلات الفخذ الخلفي على طول عظم الفخذ مع منحنى محدب يواجه عظم الفخذ. قفل الإرقاء مغلقا عند النقر الأول لمدة 30 ثانية فقط.

أدخل الإبرة من خلال الجلد من ملليمترين إلى ثلاثة ملليمترات حيث يلامس طرف الشطبة عظم الفخذ. حقن 0.15 ملليلتر من محلول العظام في عضلات الفخذ المكسرة على كل جانب. اسحب الإبرة وضع إصبع قفازا معقما بسرعة فوق موقع الحقن لوقف أي ارتجاع لمحلول العظام خارج الجرح.

امسك هذا الإصبع هناك لعدة ثوان. ضع الماوس مرة أخرى في القفص واسمح بحرية الحركة الكاملة مباشرة مع انحسار التخدير. مناسب. يجب إدارة الألم مع استيقاظ الفأر.

يظهر هذا التخطيطي العام الاستجابة المناعية ثنائية الطور بعد الصدمة عند نقطة الصفر في الساعة. يتم إحداث الصدمة. يتبع ذلك استجابة مبكرة مفرطة الالتهاب يمكن رؤيتها تصل إلى ذروتها في ست ساعات ويتم قياسها من خلال تقييم الالتهاب الجهازي والخلل الوظيفي للأعضاء البعيدة.

المكون الثاني للاستجابة المناعية اللاحقة للصدمة هو تثبيط المناعة المتأخر الذي يقاس بخلل الخلايا المناعية ويتم تصويره على أنه حوض صغير حوالي 48 ساعة. هذا رسم تخطيطي تمثيلي لاستجابة السيتوكين الالتهابية في البلازما التي تحدث في وقت مبكر بعد الصدمة وهو مثال على الالتهاب الجهازي. تم العثور على الخلل الوظيفي للأعضاء عن بعد كما تم قياسه من خلال إصابة الكبد مرتفع خلال إطار زمني مماثل.

هذا الرسم البياني التمثيلي هو مثال لتسليط الضوء على خلل الخلايا المناعية في وقت متأخر بعد الصدمة. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر ضمان العقم والتلاعب الدقيق طوال التجربة. هذا ليس نموذجا للكسر الحقيقي أو عدوى الجرح.