تصور الأعصاب القطاعي اليرقات في 3 ^{الثالثة} طور مرحلي ذبابة الفاكهة التحضيرات اليرقات

يمكن دراسة النقل المحوري من خلال تصور الأعصاب المقطعية لليرقات. ذبابة الفاكهة في الأطوار الثالث. يتم تشريح اليرقة أولا ، وتعريض الجهاز العصبي المركزي دون الإضرار بالفصوص البصرية والعقدة البطنية والأعصاب القطعية.

الخطوة الثانية من الإجراء هي إصلاح الحمم البركانية في الفورمالديهايد قبل احتضانها بالجسم المضاد الأولي طوال الليل والجسم المضاد الثانوي لمدة ساعة في الظلام. ثم يتم تثبيت الحمم البركانية على شريحة زجاجية وعيوب النقل المحوري. يمكن فحص توطين البروتين وتوزيع البروتين من خلال الفحص المجهري المناعي.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة للنقل المحوري ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على أنظمة أخرى مثل مورفولوجيا المشبك والعضلات. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأنه من الصعب في البداية إجراء هذا التشريح المسموح به ، خاصة للحفاظ على الأعصاب والعضلات المقطعية في الدماغ. لبدء هذا الإجراء ، قم بإعداد مثبت المخزن المؤقت للتشريح مرة واحدة ، وPBT مرة واحدة ، ومحلول BSA 5٪.

كما هو مفصل في الجدول الموضح قبل التشريح ، اجمع زوجا نظيفا من العضلة ذات الرأسين رقم خمسة ، وزوجا نظيفا من مقص المروحة ذات الشفرة المستقيمة ودبابيس لبدء التشريح ، واستخدم ملعقة صغيرة لجمع التجول. الثالث في يرقات النجوم مع نمط وراثي معين على طبق بتري. ثم اغسل اليرقات عن طريق شطفها في طبق بتري مملوء بالماء منزوع الأيونات للتخلص من كل الطعام.

بعد ذلك ، ضع الحمم البركانية على طبق الحماية S مع الجانب الظهري لأعلى. دبوس الحمم البركانية في الأمام والخلف. تضع النهايات قطرة من مخزن التشريح لمرة واحدة على الحمم البركانية المثبتة باستخدام مقص ناعم.

اقتطام الحمم البركانية على خط الوسط الظهري بالقرب من الطرف الخلفي. باستخدام المقص ، قم بقص بشرة الحمم البركانية من النهاية الخلفية إلى النهاية الأمامية. ضع قطرة من المخزن المؤقت للتشريح مرة واحدة على الحمم البركانية المقطعة.

باستخدام دبوس ، اختر حافة جانبية واحدة للبشرة بالقرب من منتصف الحمم البركانية وقم بتثبيت البشرة باستخدام دبوس آخر. دبوس. الحافة الجانبية الثانية للبشرة ، يتم استخدام دبابيس على كل جانب جانبي كما هو موضح في الرسم التخطيطي. الآن ، قم بإزالة الأمعاء والأجسام الدهنية بعناية ، ولم يتبق سوى الدماغ مع الفصين البصريين والعقد البطنية.

مع الأعصاب المقطعية المرفقة ، يتم إجراء التثبيت وتلوين الأجسام المضادة بعد ذلك مع اليرقات المتصلة بطبق الحراسة. احتضان اليرقات المقطعة في 50 ميكرولتر من المثبت لمدة 30 دقيقة. استبدال المثبت كل 15 دقيقة بعد التثبيت ، اشطف اليرقات مرة واحدة PBT لمدة 30 دقيقة.

عن طريق استبدال المخزن المؤقت كل 10 دقائق ، من المهم ملاحظة أنه يجب دائما غمر اليرقات في المخزن المؤقت. تحضير محلول الجسم المضاد الأساسي عن طريق تخفيفه إلى التركيز المناسب في محلول BSA بنسبة 5٪. تختلف التركيزات المثلى بالنسبة للأجسام المضادة المختلفة.

قم ببناء غرفة رطبة عن طريق تبطين طبق بلاستيكي مع كيم. يمسح منقوعا بالماء. استبدل آخر مرة PBT.

اشطفها بمحلول الأجسام المضادة الأولية المحضرة واحتضانها في الحجرة الرطبة عند أربع درجات مئوية طوال الليل في اليوم التالي. اشطف اليرقات التي تم تشريحها مرة واحدة PBT لمدة 30 دقيقة عن طريق استبدال المخزن المؤقت كل 10 دقائق. تحضير الجسم المضاد الثانوي عن طريق تخفيفه إلى التركيز المناسب في محلول BSA بنسبة 5٪.

ولف الغرفة الرطبة بورق الألمنيوم لأن بعض الأجسام المضادة الثانوية حساسة للضوء. احتضان اليرقات بمحلول الأجسام المضادة الثانوية عند 25 درجة مئوية لمدة ساعة. عند الانتهاء من الحضانة بالجسم المضاد الثانوي ، اشطف اليرقات مرة واحدة PBT لمدة 30 دقيقة عن طريق استبدال المخزن المؤقت كل 10 دقائق والمضي قدما في تركيب وتصور اليرقات المقطعة قبل تركيب الحمم البركانية على الشريحة.

قم بإعداد الشريحة عن طريق نشر خطين عموديين من طلاء الأظافر في المنتصف بمساحة كبيرة بما يكفي لغطاء للجلوس عليه كما هو موضح في الرسم التخطيطي. دع طلاء الأظافر يجف تماما عندما يجف طلاء الأظافر. ضع قطرة من المخزن المؤقت للتثبيت في الفراغ بين خطوط طلاء الأظافر العمودية على الشريحة كما هو موضح في هذه الصورة.

الشريحة جاهزة الآن للتركيب. استرجع اليرقات بعد آخر مرة PBT. شطف وإزالة المسامير الجانبية برفق من الحمم البركانية.

احرص على عدم تمزيق البشرة بعناية. قم بإزالة الدبابيس المتبقية والتقط الحمم البركانية بالملقط وضعها على الشريحة المعدة. تأكد من عدم قلب الحمم البركانية وتوجيهها بطنيا.

الجانب لأعلى ، ضع برفق زلة غطاء في الأعلى وأغلق الحواف بطلاء الأظافر كما هو موضح هنا. اليرقات جاهزة الآن للتصور تحت المجهر الفلوري. هذه الصورة التمثيلية هي من نوع البري من الحمم البرية الملطخة بالأجسام المضادة ضد البروتين المثاني المشبكي ، بروتين سلسلة السيستين.

الأعصاب المقطعية للحمم البركانية ملطخة بسلاسة. هنا. تم تلطيخ الحمم البركانية المتحولة للبروتين الحركي بالأجسام المضادة ضد CSP. تظهر الأعصاب المقطعية تراكمات هائلة تلطخ بشكل مشرق ل CSP.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر الاحتفاظ بالأعصاب المقطعية المرتبطة بالدماغ والحفاظ على العضلات سليمة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية التشريح. قم بإصلاح بقعة مناعية ثالثة وابدأ الأعصاب المقطعية اليرقية لدراسة النقل المحوري باستخدام المجهر الفلوري.