Name: تحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبية في الفئران SJL (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: اكتشف تحريض التهاب النخامية الذاتي في فئران SJL باستخدام مستضد نخامي معزز. يُمكّن هذا البروتوكول الباحثين من تقييم شدة المرض عبر التحليل النسيجي المرضي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح DK080351 إلى الكمبيوتر ، وهدية سخية من تيري وكريستين لعائلة آل غور.

البروتوكول التجريبي مرة واحدة مستعدة مستمنع النخامية (انظر المادة الرفيق) ، يتم حقنه تحت الجلد في الفئران SJL (ومختبرات جاكسون ، منظر 000686). يتم تكرار الحقن مطابقة أخرى بعد 7 أيام. ثم يتم استخدام الفئران لجمع المجراة ونتائج تشريح الجثة. الخطوة 1. الحقن تحت الجلد من الغدة النخامية في الفئران مستمنع SJL الفئران هي أول من حقن تخدير 0.5 مل من 20 ملغ / مل ، 2،2،2 ثلاثي بروم إيثانول (آفيرتين ، جزر تركس وكايكوس الأمريكية ، T - 1420) intraperitoneally. ثم يتم حقن الفئران تحت الجلد مع 100 ميكرولتر من مستحلب النخامية ، كما هو مبين في المادة 2181 إن الرب الرفيق ، ويحتوي على 1 ملغ من مستخلص الغدة النخامية و 0.25 ملغ من المواد المساعدة فرويند الكامل ل. يتم حقن مستحلب في المنطقة الظهرية اليسار الساق الخلفية ((50 ميكرولتر) والمنطقة الأربية الحق (50 ميكرولتر). يحقن مستحلب النخامية مرة أخرى في يوم 7 الى مواقع قبالة (50 ميكرولتر في حق المنطقة الظهرية والساق الخلفية ويتم رصد 50 ميكرولتر في المنطقة الأربية اليسار). الفئران يوميا خلال أول 3 أيام والأسبوعية ذلك الحين وحتى اليوم من التضحية ، والذي هو عادة 28 يوما بعد التحصين الأول. الخطوة 2. مجموعة من نتائج في الجسم الحي : فحوصات الدم النسيج الأكثر شيوعا لتقييم نتائج التجارب على الفئران في حين لا تزال على قيد الحياة والدم. ويوجه عادة في الدم بعد 14 يوما من التحصين الأول لقياس مستويات الأجسام المضادة في الدم من الغدة النخامية أو علامات أخرى مثل السيتوكينات وchemokines. ويتم جمع الدم من الفئران الحية على النحو التالي. وتعقد الفئران بشكل آمن من قبل القفا من الرقبة ، ويقع في الجزء الخلفي من عظم الفك. مرة واحدة تقع في الجزء الخلفي من عظم الفك ، تستخدم المشارط 4 ملم لاختراق حزمة تحت الفك الأوعية الدموية. بعد جمع الدم ، والضغط على مكان في المنطقة باستخدام مسحة الكحول لتجنب حدوث ورم دموي. يتم طرد الدم التي تم جمعها في 2000 ز لمدة 20 دقيقة ، وتخزينها في -80 درجة مئوية حتى استخدامها. الخطوة 3. جمع نتائج تشريح الجثة : النخامية الهيستوباثولوجيا عادة ما يتم التضحية الفئران بعد 28 يوما من التحصين الأول. الميزة الأساسية اللازمة لإنشاء تشخيص EAH هو تسلل من قبل خلايا الغدة النخامية وحيدة النواة المكونة للدم. يصرح باستخدامها في الفئران عن طريق وضعها في غرفة مغلقة البلاستيكية التي يتم perfused مع CO 2. وتحفظ في غرفة الفئران لما مجموعه 8 دقائق. بعد القتل الرحيم ، ويتم جمع الغدة النخامية كما هو موضح في مقالة الرفيق. والغدة النخامية المريضة يظهر تورم وأكثر تمسكا راسخا لجافية المحيطة بها. يتم استخدام الملقط حادة لتخفيف السحايا المحيطة النخامية. حالما يتم اغتنامها يتحرك بحرية في الغدة النخامية العظم الوتدي ، واحدة من نهاية الغدة النخامية مع ملقط ورفع بعناية الغدة النخامية. ثم وضعت في أنبوب الغدة microcentrifuge تحتوي على 5 في Beckstead مثبت. يتم إصلاح الغدة النخامية بين عشية وضحاها ، ملفوفة في ورقة العدسة ، ووضعها في الكاسيت. ثم تتم معالجة الغدد باستخدام بروتوكول التالية : <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> المحطة رقم </td><td> الكاشف </td><td> الوقت بالدقائق </td><td> درجة الحرارة (مئوية) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 70 ٪ كحول </td><td> 5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 70 ٪ كحول </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 95 ٪ كحول </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 95 ٪ كحول </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> الكحول 100 ٪ </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> الكحول 100 ٪ </td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 7 </td><td> الكحول 100 ٪ </td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 8 </td><td> الزيلين </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> الزيلين </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 10 </td><td> الزيلين </td><tد&gt; 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 11 </td><td> البارافين </td><td> 30 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 12 </td><td> البارافين </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 13 </td><td> البارافين </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr></tbody></table> بعد المعالجة ، هي جزء لا يتجزأ الغدد النخامية في البارافين وخفض ما لا يقل عن 5 أقسام nonconsecutive (5 ميكرون سميكة) من كل غدة. بعد sectioning ، ملطخة الغدد مع الهيماتوكسيلين ويوزين ، وتحليلها لتحديد تسلل وحيدات النوى. يتم تحديد المقطع مع تسلل أشد لتصحيحها. يتم تسجيل شدة استنادا إلى تقدير موضوعي لمدى استبدال الغدة النخامية الأمامية أو تدمير الخلايا المناعية : الصف 0 ، أي مرض ؛ الصف 1 ، 2 ٪ -20 ٪ تورط ؛ الصف 2 ، 20 ٪ -30 ٪ ، الصف 3 ، 30 ٪ -50 ٪ ، الصف 4 ، 50 ٪ -90 ٪ ؛ الصف 5 ، نسبة تفوق 90 ​​٪. يتم تسجيل جميع المقاطع من قبل اثنين من أفراد أعمى إلى مصدر من المقاطع.

<ol><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. , (2008).</li>
<li>Twarog, F. J., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+thyroid+autoantibodies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The production of thyroid autoantibodies in mice.</a> J Immunol. 101, 242-2450 (1968).</li>
<li>Patrick, J., Lindstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+response+to+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autoimmune response to acetylcholine receptor.</a> Science. 180, 871-872 (1973).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
<li>Beckstead, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+preservation+of+fixation-sensitive+antigens+in+paraffin-embedded+tissues%3A+addendum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A simple technique for preservation of fixation-sensitive antigens in paraffin-embedded tissues: addendum.</a> J Histochem Cytochem. 43, 345-345 (1995).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+adenophypophysitis%3A+new+experimental+disease+of+the+pituitary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Allergic adenophypophysitis: new experimental disease of the pituitary gland.</a> Science. 158, 1190-1191 (1967).</li>
<li>Yoon, J. W., Choi, D. S., Liang, H. C., Baek, H. S., Ko, I. Y., Jun, H. S., Gillam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+organ-specific+autoimmune+disease%2C+lymphocytic+hypophysitis%2C+in+hamsters+by+recombinant+rubella+virus+glycoprotein+and+prevention+of+disease+by+neonatal+thymectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Induction of an organ-specific autoimmune disease, lymphocytic hypophysitis, in hamsters by recombinant rubella virus glycoprotein and prevention of disease by neonatal thymectomy.</a> Journal of Virology. 66, 1210-1214 (1992).</li>
<li>Davis, J. R., McMahon, R. F., Lowenstein, P. R., Castro, M. G., Lincoln, G. A., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+the+ovine+pituitary+gland+is+associated+with+hypophysitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated gene transfer in the ovine pituitary gland is associated with hypophysitis.</a> J Endocrinol. 173, 265-271 (2002).</li>
<li>Rotondo, F., Quintanar-Stephano, A., Asa, S. L., Lombardero, M., Berczi, I., Scheithauer, B. W., Horvath, E., Kovacs, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenohypophysitis+in+rat+pituitary+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Adenohypophysitis in rat pituitary allografts.</a> Int J Exp Pathol. , (2010).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وقد تم الإبلاغ عن أربع تقنيات للحث على التهاب النخامية في حيوانات التجارب. تقنية الموضحة في هذه المقالة ، وهذا هو حقن بروتينات النخامية مختلطة مع مساعد فرويند ثانية ، هو أقدم واحد ، يرجع تاريخها إلى عام 1967 6 ، وتحسنت في الآونة الأخيرة 1. تقنيات أخرى هي حقن ذوبان جليكوبروتينات فيروس الحصبة الألمانية في عام 1992 7 ، حقن المجسم لاتش مباشرة في الغدة النخامية في عام 2002 8 ، وزرع الغدد النخامية من سلالة فئران واحدة تحت كبسولة الكلى من سلالة...

<table><tbody><tr><td>فئران SJL (The Jackson Laboratories)</td><td></td><td>مخزون 000686</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-ترايبرومو&amp;#8211;ثانول (أفيرتين)</td><td>TCI America</td><td>T-1420</td><td></td></tr><tr><td>بيكسـتيد&amp;rsquo;مُثبِّت</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

تحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبية في الفئران sjl

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

ويمكن استنساخ التجربة الذاتية التهاب النخامية بواسطة حقن بروتينات النخامية مختلطة مع مساعد في الفئران المعرضة 1. نماذج الماوس تسمح لنا لدراسة كيفية تتكشف الأمراض ، وتوفير كثير من الأحيان نسخة جيدة من نفس العمليات التي تحدث لدى البشر. بالنسبة لبعض أمراض المناعة الذاتية ، مثل مرض السكري نوع 1A ، وهناك نماذج (الماوس NOD) التي تتطور بشكل عفوي مرض مماثل لنظيره الإنسان. لكثير من الأمراض المناعية الأخرى ، ومع ذلك فإن هذا النموذج يحتاج إلى أن يكون ذلك حافزا تجريبيا. هناك نهج مشترك في هذا الصدد هو لحقن الفأر مع مستضد المهيمنة المستمدة من الهيئة التي تجري دراستها. على سبيل المثال ، والمحققين مهتمون الدرقية الذاتية حقن الفئران مع ثايروجلوبولين 2 ، والمهتمين في الوهن العضلي الشديد ضخها مع مستقبلات أستيل 3. إذا لم تعرف مستضد ذاتي لمرض مناعي ذاتي خاص ، محققين حقن البروتين استخراج الخام من الجهاز المستهدف من رد فعل المناعة الذاتية. التهاب النخامية عن المناعة الذاتية ، والممرضة مستضد ذاتي (ق) لا يزال يتعين تحديدها 4 ، وبالتالي يتم استخدام البروتين الخام إعداد النخامية. في هذه المقالة الفيديو نظهر كيف للحث على التهاب النخامية الذاتية التجريبية في الفئران SJL.

هذا الفيديو يبين كيف للحث على التهاب النخامية في الفئران SJL الذاتية وكيفية تقييم شدة من خلال التشريح.

تحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبية في الفئران SJL

يمكن استنساخ التهاب النخامة المناعي ذاتياً تجريبياً عن طريق حقن بروتينات النخامية ممزوجة بمادة مساعدة في فئران معرضة للإصابة. الفأر...

يتميز التهاب النخامية المناعي الذاتي بتضخم الغدة النخامية ونقص في واحد أو أكثر من الهرمونات النخامية. ولا تزال مسببات المستضدات الذاتية غير معروفة. يوضح الفيديو المصاحب بروتوكولاً لتحضير مستضد نخامي للفئران، والذي سيُستخدم هنا لإنشاء نموذج فأر يحاكي التهاب النخامية الليمفاوي المناعي الذاتي البشري.يُحقن المستضد النخامي في سلالة من الفئران القابلة للإصابة. ثم تُكرر عملية الحقن بعد سبعة أيام، وبعد مرور 14 يوماً، تُجمع عينات الدم لدراسات المؤشرات الحيوية. وفي اليوم 28، تُستأصل الغدد النخامية من الفئران التي تم التضحية بها، ثم تُقطع إلى شرائح وتُصبغ لتحديد مدى ارتشاح الكريات البيضاء.يُعد التهاب النخامية المناعي مرضاً يتم التعرف عليه بشكل متزايد، وقد يكون من الصعب تمييزه عن الكتل الأخرى غير المفرزة للهرمونات التي تنشأ في السرج التركي. وعلى الرغم من وصف المرض لأول مرة منذ حوالي 50 عاماً، إلا أن المستضدات الذاتية التي يتعرف عليها الجهاز المناعي للمريض في حالة التهاب النخامية المناعي ظلت غير معروفة. وفي عام 2008، نشرنا بحثاً حول تطوير نموذج فأر يحاكي بدقة المرض البشري الذي صُمم لتمثيله.يمكن استخدام نموذج الفأر هذا لاكتشاف المستضدات الذاتية النخامية المعنية ولمعرفة المزيد عن مسببات المرض والتاريخ الطبيعي لالتهاب النخامية. يعتمد هذا النموذج على حقن بروتينات النخامية للفأر في سلالة معرضة للإصابة مثل سلالة SJL. ويجب خلط هذه البروتينات مع مادة مساعدة قوية من أجل تهيئة بيئة التهابية موضعية تؤدي في النهاية إلى ظهور الخلايا اللمفاوية ذات التفاعل الذاتي تجاه النخامية.يحدث ذلك أولاً في العقد الليمفاوية التي تصرف موقع الحقن، ثم في الغدة النخامية. يتطلب هذا النموذج حقن كميات كبيرة نسبياً من بروتينات الغدة النخامية، بإجمالي 2 mg لكل فأر. يشير هذا إلى أن المستضد الذاتي أو المستضدات الذاتية المعنية موجودة بكميات ضئيلة داخل الغدة النخامية. يعد حقن مستحلب مُعد بشكل صحيح أمراً بالغ الأهمية لاستحثاث المرض لأنه يترجم إلى تحرير بطيء ومستمر لبروتينات الغدة النخامية في مواقع الحقن، مما يدعم في النهاية توليد وتنشيط اللمفاويات المتخصصة في الغدة النخامية.يتم في الفيديو المرافق عرض طريقة لتحضير المستضد المناعي للنخامية. يتم تجنيس الغدد النخامية المعزولة من الفئران التي تم قتلها رحيمًا وتنقيتها عن طريق الطرد المركزي منخفض السرعة. ثم يتم تقييم كمية خليط البروتين باستخدام مقايسة BCA اللونية، وتقييم جودته بواسطة الرحلان الكهربائي لهلام بولي أكريلاميد.يتم بعد ذلك خلط المتجانس البروتيني المائي مع مادة مساعدة زيتية تحتوي على عصيات mycobacterium tuberculosis غير النشطة لإنتاج مستحلب الغدة النخامية. بعد تحضير المستحلب كما هو موضح في الفيديو المصاحب، قم بإزالة إبرة الاستحلاب الدقيق من سرنجة سعة 1 مللي لتر وقم بتركيب إبرة عيار 25. يلزم 100 µL من مستحلب الغدة النخامية لكل فأر سيتم حقنه.بعد تخدير الفأر باستخدام Everton، تأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القدم، ثم احقن 50 µL من المستحلب تحت الجلد في منطقة الساق الخلفية الظهرية اليسرى. تأكد من أن سن الإبرة يقع بالكامل تحت الجلد وعدم تسرب أي من المستحلب من موقع الحقن. بعد ذلك، احقن 50 µL في المنطقة الإربية اليمنى.مرة أخرى، تأكد من عدم تسرب أي مادة للخارج. لاحظ أن المستحلب يكون مبيضاً وقد يصعب تمييزه نظراً للخلفية البيضاء لفراء فأر SGL L بعد الحقن. أعد الفأر إلى قفصه وراقب تعافيه.راقب الفئران المحقونة يومياً خلال الأيام الثلاثة الأولى بعد الحقن للتأكد من عدم حدوث إجهاد شديد. يُعد المساعد المحفز للالتهاب نظراً لاحتوائه على عصيات m tuberculosis غير النشطة. في اليوم السابع، كرر عملية الحقن في الجوانب التشريحية المقابلة.احقن 50 µL في منطقة الساق الخلفية الظهرية اليمنى، و 50 µL في المنطقة الإربية اليسرى. راقب الفأر كما سبق، حيث سيتم تقييم النتائج التجريبية بعد حدوث الاستجابة المناعية. ويُعد الدم النسيج الأكثر استخداماً لتقييم النتائج التجريبية بينما لا تزال الفئران على قيد الحياة.يتم سحب الدم بشكل روتيني بعد 14 يوماً من التحصين الأول لقياس مستويات مصل الأجسام المضادة للنخامية أو مؤشرات أخرى مثل السيتوكينات والكيموكينات. لجمع الدم من فأر حي، أمسك الحيوان بإحكام من قفا الرقبة وحدد موقع الجزء الخلفي من عظمة الفك. وبمجرد تحديد هذا الموقع بوضوح، قم بوخز الحزمة الوعائية تحت الفكية باستخدام مشرط بطول 4 mm.سيبدأ الدم في الظهور من المنطقة المثقوبة. اجمع ست قطرات من الدم في أنبوب طرد مركزي دقيق. نظف المنطقة المثقوبة بمنشفة ورقية مبللة لإيقاف النزيف.ضع أنابيب الدم في جهاز طرد مركزي وقم بتدويرها بسرعة 2000 G لمدة 20 دقيقة. تعمل عملية الطرد المركزي هذه على فصل خلايا الدم، التي ستتجمع في الراسب، عن المصل الطافي. انقل المصل إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد.يُحفظ المصل في درجة حرارة 80- درجة مئوية حتى وقت الحاجة إليه. يستغرق تطور التهاب الغدة النخامية المناعي الذاتي الكامل في الفئران المحصنة شهراً واحداً تقريباً؛ لذا، يتم التضحية بالفئران عادةً بعد 28 يوماً من عملية التحصين الأولى.بعد قطع الجمجمة، ارفع الدماغ واقلبه للخلف للكشف عن الغدة النخامية. تظهر الغدة النخامية المصابة متورمة وأكثر التصاقاً بالسحايا المحيطة بها. حرك طرف ملقط حاد حول الغدة النخامية لفصل السحايا.بمجرد أن تتحرك الغدة النخامية بحرية فوق عظم الوتد، أمسك أحد طرفي الغدة بملقط وارفعها بعناية عن عظم الوتد. ضع النسيج في أنبوب طرد مركزي دقيق يحتوي على 1 mL من محلول betted، وهو مثبت يعتمد على الزنك، وثبّت الغدة طوال الليل في درجة حرارة الغرفة. وفي اليوم التالي، انقل الغدة النخامية إلى قطعة من ورق العدسات.لف الغدة النخامية بورق العدسات ثم ضعها في كاسيت نسيجي. عالج العينة عن طريق التحضين في تركيزات متزايدة من الكحول ثم الزيلين بعد المعالجة. أزل ورق العدسات وضع الغدة النخامية في قالب معدني.بعد ذلك، قم بتغطية الغدة النخامية بالشمع (paraffin). ضع كاسيت الأنسجة فوق القالب واملأه بمزيد من الشمع. وأخيرًا، ضع المجموعة على الثلج للسماح للشمع بالتصلب.بمجرد أن يتصلب البارافين، استخدم الميكروتوم لقطع مقاطع بسمك خمس ميكرونات. انقل المقاطع إلى شريحة زجاجية. اجمع خمسة مقاطع غير متتالية على الأقل في الشريحة نفسها من كل غدة نخامية للفأر.قم بصبغ الشرائح بالهيماتين والإيوسين باستخدام محطة صبغ أنسجة آلية. افحص الشرائح باستخدام مجهر ضوئي لجمع النتائج. الميزة الأساسية للغدة النخامية التي تطور التهاب النخامية هي ارتشاحها بالخلايا اللمفاوية التي تظهر كخلايا زرقاء صغيرة تتخلل برنشيمة الغدة النخامية بشكل منفرد أو على شكل تجمعات.ترتبط الخلايا اللمفاوية بدرجات متفاوتة من تدمير الخلايا الصماوية الطبيعية في الغدة النخامية. يتم اختيار المقطع الذي يظهر فيه أشد ارتشاح لمفاوي وتدمير للغدة النخامية لتقييمه من قبل باحثين اثنين لا يعلمان الظروف التجريبية. يعتمد التقييم على تقدير ذاتي لمدى الضرر.تشير الدرجة صفر إلى أن الغدة النخامية طبيعية، أو أن الخلايا الليمفاوية والخلايا أحادية النواة المكونة للدم الأخرى تُرى نادراً. وتشير الدرجة واحد إلى أن الارتشاح أحادي النواة يشغل ما بين 2% و20% من إجمالي مساحة الفص الأمامي للغدة النخامية. وتشير الدرجة اثنان إلى أن الارتشاح أحادي النواة يشغل ما بين 20% و30% من إجمالي مساحة الفص الأمامي للغدة النخامية.تشير الدرجة ثلاث إلى أن الارتشاح أحادي النواة يشغل ما بين 30 و 50% من إجمالي مساحة الغدة النخامية الأمامية. وتشير الدرجة أربع إلى أن الارتشاح أحادي النواة يشغل ما بين 50 و 90% من إجمالي مساحة الغدة النخامية الأمامية، بينما تشير الدرجة خمس إلى أن الارتشاح أحادي النواة يشغل كامل مساحة الغدة النخامية الأمامية تقريبًا. وبمجرد إتقان هذه العملية، يمكن إجراء حقن المستضد في الفأر الواحد خلال 15 دقيقة.يمكن إتمام عملية جمع الدم المحيطي من فأر واحد في غضون خمس دقائق، وإعداد شرائح التشريح المرضي النسجي في ست ساعات أثناء محاولة إجراء عملية التحصين. ومن المهم إيلاء اهتمام وثيق لصحة الفأر بعد التخدير وحقن المستضد. وذلك بالإضافة إلى التشريح المرضي النسجي للغدة النخامية.يمكن استخدام هذا الإجراء لجمع مجموعة واسعة من النتائج التجريبية باستخدام طرق متنوعة، مثل تقييم المجموعات الفرعية من الخلايا في العقد اللمفاوية المصرفة عن طريق قياس التدفق الخلوي. وتمهد تقنية التحصين بمستخلص نسيجي لتحفيز مرض مناعي ذاتي الطريق أمام الباحثين في مجال المناعة الذاتية لاكتشاف الأحداث الرئيسية في إمراضية المرض. وبعد مشاهدة هذا الفيديو، ينبغي أن يكون لدى الباحث فهم جيد لكيفية تحصين الفئران لتحفيز التهاب النخامية المناعي الذاتي التجريبي وكيفية تقييم حالات حدوثه وشدته.لا تنسَ أن العمل باستخدام شفرات الميكروتوم قد يكون خطيراً؛ لذا يجب دائماً اتخاذ الاحتياطات اللازمة، مثل ارتداء القفازات والعمل في ظروف إضاءة جيدة.

induction-of-experimental-autoimmune-hypophysitis-in-sjl-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

تأخر فرط نوع (DTH) هو رد فعل التهابية بوساطة الخلايا الليمفاوية الذاكرة CCR7 - المستجيب (تيم) تي. نحن هنا لشرح كيفية تنشيط خلايا محددة مستضد TEM ، لحث DTH بالتبني في الفئران لويس ومراقبة الاستجابة للالتهابات.

الاستقراء والرصد من فرط الحساسية المتأخرة نوع بالتبني في الفئران

يمكن استنساخها الذاتية التهاب النخامية في الفئران عن طريق حقن مستخرج من البروتينات النخامية الماوس.

إعداد مستمنع ماوس النخامية للتحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبي

يوضح الفيديو تحريض التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في نموذج فأر عن طريق حقن مزيج من البروتينات السكرية قليلة التغصن قليلة التغصن والمتفطرة السلية المعطلة. يمكن النموذج الباحثين من دراسة آليات المرض واختبار التدخلات العلاجية.

تحريض التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في نموذج الفأر

في هذا الفيديو ، تم إنشاء نموذج فأر للتصلب المتعدد باستخدام التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي (EAE). يتم حقن الفأر بمستحلب يحتوي على ببتيد عصبي ومادة مساعدة ، مما يؤدي إلى استجابة مناعية تنشط الخلايا التائية ذاتية التفاعل. يتبع ذلك حقن سم السعال الديكي (PTX) لزيادة نفاذية الحاجز الدموي الدماغي ، مما يسمح للخلايا التائية ذاتية التفاعل بالتسلل إلى الدماغ. يبدأ هذا التسلل في سلسلة إشارات تؤدي في النهاية إلى تلف المايلين ، مما يحاكي حالة إزالة الميالين للتصلب المتعدد.

يعد نقل الخلايا الليمفاوية bm12 إلى متلقي C57BL / 6 نموذجا راسخا للذئبة الحمامية الجهازية. نصف هنا كيفية بدء المرض باستخدام هذا النموذج وكيفية توصيف الخلايا المساعدة المسامية التائية والخلايا البائية المركزية الجرثومية وخلايا البلازما عن طريق قياس التدفق الخلوي.

ومحرض نموذج bm12 من الذئبة الحمامية الجهازية (SLE) في C57BL / 6 الفئران

تصف هذه المخطوطة طرق تحريض وتسجيل نموذج التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي (EAE) ، جنبا إلى جنب مع تقييم توزيع الخلايا المناعية ومستويات السيتوكين mRNA في الغدد الليمفاوية والطحال والدم والحبل الشوكي باستخدام قياس التدفق الخلوي وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي ، على التوالي ، في مراحل مرضية مختلفة.

تحريض التجريبية المناعة الذاتية التهاب الدماغ في الفئران وتقييم توزيع الأمراض التي تعتمد على خلايا المناعة في الأنسجة المختلفة

يوجز هذا التقرير نهج بسيط للحث على نجاح العصب الذاتية التجريبية (EAN) استخدام البروتين المايلين صفر الببتيد180-199 (P0) في تركيبة مع adjuvant فروند بالكامل والسمية السعال الديكي. نحن نقدم نموذجا متطورة قادرة على دقة تقدير مدى عجز وظيفي وأمراض الأعصاب التي تحدث في هذا EAN.

نهج بسيط للحث على العصب الذاتية التجريبية في الفئران C57BL/6 للتقييمات الفنية ولاثيل

نحن نصف نموذج التحصين في الجسم الحي ، والتهاب الكبد الانتقالي في الفئران BALB / c التي يمكن استخدامها لدراسة التسبب في التهاب الكبد المناعي الذاتي الناجم عن المخدرات بما في ذلك الاختلافات بين الجنسين التي شوهدت في هذا المرض. سنصف كيف يوضح هذا النموذج التحليلات القابلة للتكرار باستخدام التقنيات التجريبية في الجسم الحي وفي المختبر.

تحريض التهاب الكبد المناعي الذاتي الناجم عن الأدوية في الفئران BALB / c لدراسة آلياته المسببة للأمراض

تم إنشاء عدة أنواع من النماذج الحيوانية لالتهاب الغدة الدرقية هاشيموتو ، وكذلك التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي التلقائي في فأر NOD. الفئران H-2h4 هي نموذج بسيط وموثوق لتحريض HT. توضح هذه المقالة هذا النهج وتقيم العملية المرضية لفهم أفضل لنموذج الفئران SAT.

جيل من الفأر نموذج التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي التلقائي

يعد التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي أحد أكثر نماذج الفئران استخداما على نطاق واسع لمرض التصلب المتعدد. في البروتوكول الحالي ، يتم تحصين الفئران C57BL / 6J من كلا الجنسين بببتيد البروتين السكري قليل التغصن المايلين ، مما يؤدي بشكل رئيسي إلى شلل جزئي تصاعدي في الذيل والأطراف. نناقش هنا بروتوكول التعريف والتقييم EAE.

نمذجة التصلب المتعدد في الجنسين: MOG35-55-التهاب الدماغ المناعي الذاتي التجريبي الناجم عن

هنا ، نبلغ عن بروتوكول ينشئ نموذج فأر التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) من خلال النقل بالتبني لخلايا CD4 + T من فئران SKG ، مما يوفر أداة تجريبية سريعة وموثوقة للتحقيق في الآليات المناعية ، والتقدم المرضي ، وتطوير علاجات جديدة لالتهاب المفاصل الروماتويدي .

نموذج نقل بالتبني لالتهاب المفاصل الروماتويدي في الفئران

اكتشف تحريض التهاب النخامية الذاتي في فئران SJL باستخدام مستضد نخامي معزز. يُمكّن هذا البروتوكول الباحثين من تقييم شدة المرض عبر التحليل النسيجي المرضي.

تحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبية في الفئران SJL

استكشف المزيد من الفيديوهات