متحد البؤر المجهري القرنية : رواية غير الغازية تقنيات لقياس الصغيرة الأمراض الليفية في اعتلال الأعصاب المحيطية

يوضح هذا الفيديو إجراءً لتصوير ألياف C القرنية باستخدام تقنية المجهر البؤري للقرنية (CCM) غير الباضعة، مما يتيح تقدير كمية التلف في الألياف العصبية. أولاً، يتم ضبط المستوى البؤري لعدسة جهاز CCM، ثم يوضع جل الدموع اللزج على العدسة قبل تركيب الغطاء المخصص للاستخدام مرة واحدة. بعد ذلك، يتم وضع قطرات تخدير وجل الدموع اللزج على العين.

بعد ذلك، يتم ضبط الكاميرا لتحقيق التلامس بين الهلام الموجود على مقدمة العدسة وقرنية المريض. وأخيراً، يتم ضبط عمق مستوى التركيز والتقاط صور للأعصاب القرنية من الجزء المركزي لطبقة بومان. ويمكن ملاحظة التغيرات المورفولوجية في ألياف الأعصاب القرنية لتقدير درجة الاعتلال العصبي.

تعد هذه التقنية حديثة للغاية، وقد استُخدمت سابقاً في مجالي قياس البصر وطب العيون، ولكن على مدار السنوات الثماني الماضية تقريباً، استخدمناها بفعالية كبيرة لدراسة وتقييم الاعتلال العصبي السكري وغيرها من أنواع الاعتلالات العصبية الطرفية. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية في أنها تتيح قياس تضرر الألياف الصغيرة في مرحلة مبكرة جداً، ومن ثم تصنيف شدة الاعتلال العصبي لدى المرضى بطريقة غير جراحية تماماً، ويمكننا القيام بذلك بسرعة فائقة من خلال مسح يستغرق دقيقتين، والذي يمكن بعد ذلك تحويله إلى كميات تحدد شدة الاعتلال العصبي؛ وبناءً على ذلك، نأمل أن تحل هذه الطريقة محل بعض التقنيات الأخرى الأكثر توغلاً، مثل خزعة الجلد وخزعة العصب. وبالرغم من أنها تبدو تقنية بسيطة بشكل عام، إلا أنها تتطلب في الواقع خطوات محددة لالتقاط الصورة بشكل مثالي ثم القيام بتحليلها كمياً.

ونريد حقاً أن نجعل هذه العملية برمتها واضحة وجلية لأي شخص آخر قد يرغب في استخدام هذه التقنية. تتمثل الخطوة الأولية في الفحص باستخدام مجهر HRT confocal للقرنية في تحضير طرف العدسة الشيئية عند أنبوب العدسة الشيئية لكاميرا المسح بالليزر. اضبط الانكسار على +12 diopters، ثم اضبط الكاميرا على أدنى موضع وأغلق العدسة عن طريق تدويرها عكس اتجاه عقارب الساعة.

ضع قطرة كبيرة متجانسة وخالية من الفقاعات بحجم P من دموع فيسكو (visco tears) على طرف العدسة. أخرج غطاء التومو (tomo cap) من وعائه المعقم وثبته فوق طرف العدسة إلى أقصى حد ممكن فوق الحامل، بحيث يشكل الجل سطحاً مقعراً بين العدسة الشيئية والغطاء. احذر من لمس السطح الأمامي لغطاء التومو أثناء التثبيت.

الآن، حرك كاميرا المسح بالليزر إلى أقصى نقطة للخلف على حامل الكاميرا لتصوير السطحين الداخلي والخارجي لغطاء التوموجراف (tomo cap). يظهر كلاهما كانعكاس ليزر ساطع على شاشة العرض. اضبط عجلة ضبط المستوى البؤري حتى يتم ملاحظة انعكاس ساطع، مما يشير إلى أن العدسة مركزة داخل الجزء الأمامي من الغطاء.

يجب أن تكون قيمة العمق الظاهرة في شاشة عرض موضع التركيز الآن بين -150 µm و +150 µm. أعد ضبط إعداد العمق إلى الصفر. والآن، دعونا نرى كيفية تحضير المريض.

بعد تخدير عيني الخاضع للفحص بقطرة من هيدروكلوريد 0.4%، يتم ترطيب مقدمة العين بدموع لزجة (visco tears). يُجلس الخاضع للفحص بشكل مريح مع وضع ذقنه على مسند الذقن، مع التأكد من ضغط جبهته بإحكام على قضيب الجبهة. تسهل عملية الفحص من خلال توجيه المريض لتثبيت نظره على ضوء التثبيت الخارجي.

بفضل الحجم المدمج لرأس المجهر، فإن العين التي لا يتم فحصها لا تتعرض للحجب، مما يضمن عدم إعاقة العين المقابلة للخاضع للفحص. وهذا يتيح استخدام أهداف المسافة. قم بتحديد موضع كاميرا CCD بحيث يكون وصولها البصري عمودياً على الوصول البصري لكاميرا المسح بالليزر.

يجب أن تكون الكاميرا على الجانب الأيمن للمريض عند تصوير العين اليمنى والعكس صحيح. في هذا الموضع، يظهر السطح الأمامي لغطاء الـ tomo في مركز كاميرا CCD. صورة مباشرة.

حرك كاميرا المسح بالليزر باتجاه المريض حتى تصبح قرنية المريض على مسافة تتراوح بين 5 إلى 10 مليمتر تقريبًا من غطاء التومو (tomo cap). ثم استخدم مقابض ضبط المحاور الرأسية والأفقية الموجودة على حامل الكاميرا لتحريك كاميرا المسح بالليزر للأعلى وللأسفل ولليسار ولليمين حتى يتم وضع غطاء التومو في مركز قرنية المريض. الآن اطلب من المريض فتح عينيه على أوسع مدى ممكن.

حرك كاميرا المسح بالليزر ببطء نحو المريض حتى تلامس غطاء التصوير المقطعي (tomo cap) قرنية المريض. في هذه المرحلة، تحقق من أن ضوء الليزر الأحمر يقع في مركز القرنية وأن انعكاس شعاع الليزر من القرنية يحدث بالضبط عند القطب الأمامي للقرنية. يكون التلامس بين العدسة والقرنية في حده الأدنى عند الضبط الأمثل.

يظهر جسر هلامي رقيق بين غطاء التصوير المقطعي (tomo cap) والقرنية في الصورة الحية لكاميرا CCD. إذا كان هناك ضغط زائد بين غطاء التصوير المقطعي والقرنية، فسيظهر مظهر مسطح في القرنية عبر كاميرا CCD. تظهر الصورة الحية والمنحرفات على صورة CCM.

بعد ضبط وضعية المريض، قم بتشغيل كاميرا HR three laser، وستظهر نافذة الحصول على الصور على الشاشة. استخدم صورة CCD لتحديد موضع غطاء tomo وضوء الليزر على قرنية المريض. يوفر نظام CCM ثلاثة خيارات لالتقاط الصور.

يتيح المسح المتسلسل التقاط ما يصل إلى 100 صورة بمعدل إطارات قابل للتعديل. يتم اختيار معدل إطارات يتراوح بين 30 وإطار واحد في الثانية. وبناءً على ذلك، يمكن تصوير مقطع فيديو تتراوح مدته من 3 إلى 100 ثانية.

في وضع مسح الحجم، تلتقط الكاميرا تلقائيًا سلسلة من 40 صورة عند مستويات بؤرية متتالية. يمكن مسح عمق إجمالي يصل إلى 85 micrometers، وتبلغ المسافة البؤرية بين صورتين متتاليتين 2.1 micrometers تقريبًا. أما الخيار الأخير فهو وضع المقطع، والذي سيتم استخدامه في هذه التجربة.

يتيح هذا الوضع التصوير الأمثل من خلال الحصول على صور فردية واضحة وتخزينها في كل مرة يتم فيها الضغط على مفتاح القدم. يُستخدم هذا الوضع لالتقاط صور للطبقة القرنية بأكملها، بما في ذلك طبقة Bowman في مركز القرنية. وبعد التقاط عدد كافٍ من الصور، يمكن استخدام أوضاع أخرى بما في ذلك وضع التتابع ووضع الحجم.

بعد إجراء بضع عمليات مسح، يمكن تغيير المستوى البؤري للعدسة لقياس عمق طبقة الخلايا القرنية بالنسبة لسطح القرنية، وذلك عن طريق ضبط طبقة الخلايا الطلائية لتكون في بؤرة التركيز ثم النقر على زر إعادة الضبط (reset) لتعيين قيمة العمق عند الصفر. بعد اكتمال الفحص، قم بإيقاف تشغيل الكاميرا بالنقر على زر تشغيل الكاميرا في نافذة الاستحواذ. نبه المريض بضرورة عدم فرك العينين حتى يزول مفعول التخدير الموضعي.

قم بإزالة غطاء التصوير المقطعي (tomo cap) من الكاميرا وتخلص منه، ثم نظف عدسة المجهر باستخدام مسحة قطنية مبللة بالماء المقطر. والآن، دعونا نرى كيفية تحليل الصورة وقياس معالم الألياف العصبية لمراجعة الفحوصات الحالية وتحليلها. أولاً، اختر سجل المريض المناسب في نافذة قاعدة البيانات.

توفر نافذة عرض الصور نظرة عامة على فحوصات القرنية الحالية للمريض المحدد. يتم تخزين الفحوصات التي أُجريت في أيام مختلفة في علامات تبويب زيارات منفصلة. وتُمثل أنواع المسح الثلاثة المختلفة بواسطة ثلاث أيقونات مختلفة. في علامة تبويب زيارة القرنية HRT 3 في نافذة عرض الصور الخاصة ببرنامج Heidelberg Eye Explorer.

لمعاينة صورة القرنية، انقر نقراً مزدوجاً على أيقونة الصورة المناسبة، ثم اضغط على "show now" لتصدير الصور المناسبة لإجراء مزيد من التحليل؛ انقر على "export" في شريط الأدوات، ثم حدد المجلد الذي تريد حفظ الصور فيه. ونظراً لأن التركيز الأساسي لهذا البحث ينصب على طبقة بومان والأعصاب القرنية، فسيتم تحليل الصور المأخوذة من هذه الطبقة فقط. يتم اختيار خمس إلى ست إطارات من طبقة بومان لكل شخص خاضع للدراسة عند أعماق مختلفة من القرنية.

يتم إجراء تحليل الصور باستخدام برنامج متخصص طورته مجموعتنا يسمى CCM Image Analysis Tools، الإصدار 0.64. ويتم قياس المعاملات الرئيسية للأعصاب القرنية باستخدام البرنامج، ومنها كثافة الألياف العصبية، والتي تُعرف بأنها عدد الأعصاب الرئيسية في الإطار الواحد. أما كثافة تفرعات الأعصاب فهي إجمالي عدد الفروع الرئيسية في الإطار الواحد.

طول الليف العصبي هو الطول الإجمالي للأعصاب الرئيسية والفروع الرئيسية لكل ليف عصبي في الإطار. أما الالتواء فهو درجة التواء الأعصاب الرئيسية لكل إطار. لفتح صورة CCM، انتقل إلى الملف (file) ثم افتح (open).

بمجرد تحميل الصورة، يتم عرض حجمها ونوعها في مربع معلومات الصورة الموجود في الجانب العلوي الأيسر من لوحة التحكم، ويظهر المقياس الافتراضي في سطر تحرير معلومات الصورة. إذا كان المقياس مختلفاً، فقم بتعديل الرقم الموجود في سطر التحرير. لبدء تحليل الصورة، اختر المعلمة التي تريد قياسها من مربع المقاييس الموجود في الجانب العلوي الأيمن من لوحة التحكم.

في مربع النتائج الموجود أسفل الصفحة، يتم عرض NFD وMBD كأرقام فعلية. ويتم عرض NFL بالملليمترات، بينما تظهر الالتوائية كمعامل التوائية. ويمكن تصدير النتائج إلى ورقة عمل Excel.

عند فتح صفحة Excel، ستُعرض النتائج بوحدة عدد لكل مليمتر مربع لـ NFD، وبوحدة مليمتر لكل مليمتر مربع لـ MBD وNFL، ومعامل الالتواء لـ NFT. ولإجراء هذه القياسات، ابدأ بتحديد كل عصب رئيسي، ثم حدد كل فرع من فروع العصب الرئيسي. وأخيراً، قم بتتبع مسار كل عصب في الإطار.

يمكن استخدام قلم رقمي لتحقيق دقة أفضل. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها في غضون دقيقة واحدة إذا طُبقت بشكل صحيح أثناء محاولة إجراء هذا الإجراء. ومن المهم اتباع التعليمات المفصلة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، نأمل أن تكون قد اكتسبت فهماً جيداً لكيفية العمل والتقاط الصور من الطبقة الحركية للقرنية باستخدام المجهر البؤري للقرنية، وكيفية قياس وتحليل الصور المأخوذة من هذه الطبقة لدى المرضى الذين يعانون من الاعتلال العصبي المحيطي، وبالأخص الاعتلال العصبي السكري. ولا تنسَ أن العمل باستخدام CCM يتطلب خبرة، لذا يُنصح بأن يقوم المختصون المدربون على فحص العين بإجراء هذا الإجراء.