سبتمبر 18, 2010
تمتعت معرفة الآليات الجزيئية الكامنة وراء تنبيغ ذوقي مؤخرا تقدما كبيرا ، إلى حد كبير بسبب استخدام النماذج الحيوانية. ومع ذلك ، فإن التنوع الواسع في حساسية الذوق والنوعية بين الدراسات أوامر الثدييات في الأنسجة البشرية. وصفنا تقنية خزعة لجمع الخلايا الحية من طعم حليمات اللسان على الإنسان.
الهدف العام من هذا الإجراء هو إزالة شكل الفطريات البشرية لكل حبيبات. يتم تحقيق ذلك عن طريق لف وسادة Gores معقمة أولا حول الربع الأمامي من اللسان وإمساكها بقوة باليد اليسرى أثناء الإمساك. ادفع السبابة اليسرى برفق من أسفل اللسان بحيث يتم شد اللسان فوقه ، مما يكشف عن الفطريات المستهدفة لكل حبة.
الخطوة الثانية من الإجراء هي حقن 0.25 ملليلتر من مخدر ليدوكائين بنسبة 2٪ في المنطقة الظهرية للسان البعيد عن موقع التجميع. انتظر ثلاث دقائق حتى يصبح التخدير ساري المفعول. الخطوة الثالثة من الإجراء هي إزالة قطع الحليمة ، ويتم تنفيذها باستخدام الجزء الأعمق من الشفرات بالقرب من الشوكة.
ضع المقص مع فتح الشفرات فوق الهدف لكل عمود مع دفع الأنسجة المحيطة لأسفل بحيث تنبثق الحليمة المستهدفة بين الشفرات المقطوعة بحركة واحدة سريعة. تجنب استخدام طرف المقص للقطع. الخطوة الأخيرة من الإجراء هي رفع القطع لكل عمود بشفرات المقص واستخدام ملقط مستقيم.
انقل القطع برفق لكل عمود إلى المخزن المؤقت المناسب. تجنب الضغط على كل عمود. يمكن استخدام المستحضر للتهجين في الموقع ، والكيمياء المناعية ، وتفاعل البوليميراز المتسلسل ، وما إلى ذلك.
إنها أيضا الركيزة التي يمكن من خلالها الحصول على خلايا براعم التذوق المعزولة المفردة. الميزة الرئيسية لهذا الإجراء هي أنه في الوقت الحالي ، إنها الطريقة الوحيدة لجمع الذوق البشري الطازج. حليمات الفطريات.
للبدء ، اجلس الموضوع على كرسي أسنان أو مقعد به مسند رأس. بعد ذلك ، افحص تجويف الفم للتأكد من صحة الأنسجة العامة. عند البحث عن أي علامات لجفاف الفم أو آفات اللسان ، يتم استبعاد أي موضوع تظهر عليه علامات أمراض الفم ، بما في ذلك آفات اللسان أو جفاف الفم من الدراسة.
اطلب من الشخص شطف فمه بالماء لإزالة الحطام طوال اليوم من تجويف الفم بيد مرتدية قفازات. استخدم وسادة شاش معقمة لتثبيت الربع الأمامي من اللسان أثناء امتداده من تجويف الفم. في حالة التخدير ، استخدم حقنة توبركولين واحدة سم مكعب بإبرة قياس 28 × نصف بوصة و 2٪ ليدوكائين.
مع تخفيف واحد إلى 100،000 من الأدرينالين ، أدخل الإبرة أسفل السطح الظهري مباشرة. يجب أن يكون موقع التخدير بعيدا عن موقع التجميع لتجنب تداخل الليدوكائين مع الدراسات اللاحقة بعد إدخال الإبرة وقبل حقن شفط التخدير للتأكد من عدم إصابة الأوعية الدموية. ومع ذلك ، هذا غير مرجح لأن الحقن على السطح الظهري.
تمتد الشرايين اللسانية الأكبر في الأوردة اللسانية على طول السطح البطني للسان. ستظهر منطقة التخدير التي تبلغ مساحتها سنتيمترا مربعا تقريبا شاحبة قليلا مقارنة بالأنسجة المحيطة. ويرجع ذلك إلى تورم الأنسجة لأنها تضغط على الأوعية الدموية الصغيرة والتأثير المضيق للأوعية الدموية للإبينفرين.
بعد حوالي ثلاث دقائق ، يتم استخدام مسبار لاختبار منطقة الحقن بحثا عن الخدر. لإزالة وسادة عنق اللسان ، لف لسان الشخص في GREs معقمة وامسكه في اليد المقابلة لليد التي سيتم استخدامها لإجراء الخزعة. امسك اللسان بقوة ، ولكن بحذر لتجنب التسبب في إزعاج غير ضروري.
ضع السبابة في اليد ممسكا باللسان مباشرة أسفل الموقع الذي يتم فيه إجراء الخزعة وادفعه لأعلى أثناء مد اللسان على طرف الإصبع ، مع تعريض الحليمات لسهولة الخزعة. يمكن تمييز براعم التذوق أو الحليمات الفطرية بسهولة عن شكل المهرة المحيطة ، الحليمات من خلال شكلها وحجمها. تشكل الفطريات حليمات حولها ومعزولة إلى حد ما عن محيطها.
في المنطقة المجاورة مباشرة ، توجد مساحة دائرية خالية من الحليمات الخيطية. يبلغ قطر هذه المساحة حوالي ملليمتر واحد. السمة المميزة الأخرى للحليمات الفطرية هي الأشجار الشعرية الممتدة التي يمكن رؤيتها فوق معظم حليمات الفطريات.
ومع ذلك ، فإن هذه الأوعية الدموية الصغيرة ليست بالضرورة تنبئات جيدة بوجود براعم التذوق في تلك الحليمات. كقاعدة عامة ، ابدأ في الحصاد باتجاه الواجهة الأمامية والعودة من طرف اللسان لتجنب أي نزيف شعري من حجب موقع مجموعة الأنسجة التالية. بمجرد تحديد الحليمة المناسبة ، استخدم مقصا صغيرا زنبركيا لقصها.
لاستخدام مقص الجراحة المجهرية بشكل فعال. لا تستخدم طرف الشفرة للقطع ، بل قم بقصها داخل الشفرة قدر الإمكان بالقرب من الشوكة. استخدم حركة قطع واحدة للمقص لإزالة الحليمة.
كلما ظهرت الحليمة المستهدفة داخل الشفرات المفتوحة ، زادت فعالية الجروح. بعد ذلك ، باستخدام ملقط دومون من نوع نمط صغير ، ضع المخزن المؤقت المبرد للحليمة الذي يتكون من 130 مللي مولي كلوريد الصوديوم ، وخمسة مللي مولار من كلوريد البوتاسيوم ، وواحد من كلوريد الكالسيوم المليمولار ، وواحد من كلوريد المغنيسيوم المليمولار ، وبيروفات الصوديوم المليمولي 20 ملليمولار ، و H-E-P-E-S ، ودرجة الحموضة الصوديوم 7.2 الأسمولية حوالي 305 مللي أوسمول. من الضروري عدم الضغط على الحليمة بين شفرات الملقط.
الأنسجة هشة للغاية ويجب التعامل معها بحذر شديد. بعد إزالة الحليمات ، اطلب من الشخص البقاء على الكرسي لمدة 10 إلى 15 دقيقة. أخبرهم ألا يعضووه على لسانهم المخدر ، ولكن إبقائه في حالة راحة.
مراقبة المريض بصريا. من المتوقع أن يتلاشى التخدير في غضون 30 إلى 60 دقيقة تقريبا لأن موقع الخزعة قد يكون مؤلما قليلا. بعد الإجراء ، اطلب من الشخص أن يكون على دراية بالأطعمة ذات درجة الحرارة الحارة أو الساخنة أو المشروبات الغازية أو المشروبات شديدة الحرارة أو البرودة.
أبلغ المريض أيضا أن أي لون ضارب إلى الحمرة الطفيف للعاب أمر طبيعي أو يتوقف بعد ذوبان الجلطة. أخيرا ، تذكر الموضوع بعد 30 إلى 40 يوما من إزالة البابي لتقييم موقع الخزعة. كما هو موضح هنا.
عندما يتم إجراء الخزعة بشكل صحيح ، يكون عنق الرحم أبيض صحي المظهر وقطره حوالي 0.5 إلى ملليمتر واحد. يظهر في هذا الشكل برعم تذوق نموذجي من حليمة ذات طعم ثابت بارا فورمالديهايد. يمكن أيضا معالجة الحليمات المأخوذة من الخزعة إنزيميا لتحقيق تفكك الذوق.
يمكن الحفاظ على خلايا البراعم بعد خلايا التفكك الأنزيمي لمدة تصل إلى أربع ساعات في طبق بتري مرطب بأربع درجات مئوية. في هذه الحالة ، يمكن استخدامها لتجارب مثل طعم تفاعل البوليميراز المتسلسل أحادي الخلية. خلايا البراعم نحيلة وثنائية القطب.
باستخدام تقنية تم تطويرها في مختبرنا، يمكن التقاط الخلايا بشكل فردي باستخدام ماصة رقعة. بعد حوالي 20 دقيقة تحت المجهر ، تبدأ الخلايا في تطوير فقاعة موت المبرمج. يوضح هذا الشكل مظهر اللسان.
بعد 10 دقائق من ثماني دقائق ، تمت إزالة حليمات الفطريات فورم دون إشعار التخدير ، وثماني بقع حمراء طفيفة حيث تم قطع الحيم. لم يلاحظ أي نزيف بعد 40 يوما من الخزعة أو إعادة نمو الحمر لتحديد ما إذا كان البابي المتجدد يعمل. طلبنا من متطوعنا الموافقة على خزعة ثانية تتضمن نفس الحليمات بالضبط لتحديد البابيب المناسب لإعادة الحصاد بشكل صحيح.
لقد أنشأنا شبكة تناسب البابي الثمانية التي تمت إزالتها في الأصل وقمنا بتثبيتها على لسان نفس المتطوع. بعد 40 يوما ، أزلنا القليل من حبوب عنق الرحم نفسها وقمنا بمعالجتها من الكيمياء المناعية. في هذا الشكل ، لاحظ الخطوط العريضة لبرعم التذوق والتلوين المناعي الإيجابي للفوسفوليباز C beta two ، وهو إنزيم مرتبط بنقل خلايا التذوق من النوع الثاني.
توضح هذه البيانات أن حبوب منع الحمل الفطرية تتجدد لتشكيل براعم التذوق الوظيفية بمجرد إتقانها ، وإذا تم إجراؤها بشكل صحيح ، يجب ألا يستغرق هذا الإجراء أكثر من خمس إلى 10 دقائق. مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في المعنى الكيميائي لاستخدام أنسجة الذوق البشري لدراسة الذوق البشري. سريريا ، نجد أن هذه التقنية شبه غير مؤلمة.
يتعافى المرضى منه بسرعة كبيرة ويسمح العائد الذي يحصل عليه المرء بالوصول إلى العينات المرضية التي لا يتم الاحتفاظ بها عادة. بالإضافة إلى ذلك ، فإن هذه التقنية كافية بحيث يرغب الأفراد في العودة وتكرارها عند الضرورة للأغراض العلمية.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
توضح هذه المقالة تقنية خزعة ذات تدخل جراحي محدود لجمع الحليمات الفطرية البشرية من اللسان، والتي تحتوي على براعم التذوق. تمكّن هذه الطريقة الباحثين من الحصول على أنسجة تذوق بشرية حيوية لإجراء الدراسات الجزيئية والخلوية والنسيجية، مما يساهم في تعزيز فهم عملية نقل الإشارات التذوقية لدى البشر بما يتجاوز النماذج الحيوانية.
يتيح الوصول إلى أنسجة تذوق بشرية حيوية الاستقصاء المباشر لآليات نقل التذوق، مما يعالج فجوة حرجة في النماذج قبل السريرية حيث تحد الاختلافات في المستقبلات الخاصة بكل نوع من الثقة في النتائج الانتقالية. توفر تقنية الخزعة هذه مصدراً قابلاً للتكرار للحليمات الفطرية للتحليل الجزيئي والخلوي، مما يدعم التحقق من الأهداف في مسارات الاستشعار الفموي. ومن خلال تسهيل عزل خلايا براعم التذوق والتطبيقات اللاحقة مثل الكيمياء النسيجية المناعية وتفاعل البوليميراز المتسلسل للخلية الواحدة (single-cell PCR)، تعزز هذه الطريقة الثقة التنبؤية في برامج الاكتشاف المبكرة التي تستهدف المسارات المرتبطة بالتذوق.
تندرج هذه التقنية ضمن سير عمل الاكتشاف المبكر من خلال توفير مواد بيولوجية مشتقة من البشر، مما يساعد في تحديد الأهداف المناسبة وبيان مدى ملاءمة المقايسة قبل البدء في فحص المركبات.