تحديد عدد الخلايا خلال زراعة الخلايا باستخدام خلية مكافحة الصولجان

عداد الخلايا الصولجان هو جهاز آلي محمول لحساب الخلايا لمراقبة قطر الخلية وحجمها ، والتحقق من صحة وجودة التجمعات الخلوية. إنه يوفر مزايا كبيرة مقارنة بطرق العد الأخرى ، بما في ذلك الدقة المحسنة وسهولة الاستخدام والتكلفة المنخفضة لعد الخلايا. باستخدام الصولجان ، اتبع التعليمات الموجودة على شاشته الرسومية لشفط الخلايا في المستشعر القابل للتصرف

ثم يتم حساب الخلايا ويقوم الجهاز بالإبلاغ عن تركيزات الخلايا والإحصائيات ، والتي يمكن تحميلها على جهاز كمبيوتر وتحليلها. مرحبا ، أنا سونيا. أنا عالم أبحاث هنا في ميلبورت، واليوم سأريكم كيفية استخدام الصولجان.

الخلايا خطوة ضرورية ولكنها مملة لزراعة الخلايا في المختبر. تضمن تركيزات الخلايا المتسقة قابلية التكاثر والدقة التجريبية. يعد عدد الخلايا مهما لمراقبة صحة الخلايا ومعدل التكاثر ، وتقييم خلايا البذر الخالدة أو المتحولة للتجارب اللاحقة ، أو التعدي أو العدوى ، والاستعداد للمقايسات القائمة على الخلايا على الرغم من الحاجة إلى السرعة والدقة.

في عد الخلايا ، قام 71٪ من 400 باحث بمسح الخلايا باستخدام مقياس الخلوي الدموي. في حين أن قياس الدم الخلوي غير مكلف ، إلا أنه شاق ويخضع لتحيز المستخدم وسوء استخدامه ، مما يؤدي إلى أعداد غير دقيقة. تشمل مصادر الخطأ في قياس الدم الخلوي التوزيع غير المتكافئ للخلايا في العينة ، وعدد الخلايا الكبير جدا أو القليل جدا في العينة.

القرارات الذاتية بشأن ما إذا كانت خلية معينة تقع ضمن منطقة العد المحددة. تلوث مقياس الخلوي الدموي ، وتباين المستخدم في معدل ملء مقياس الخلوي الدموي للتخفيف من الملل المرتبط بالعد اليدوي. 29٪ من الباحثين يعدون الخلايا باستخدام أجهزة عد الخلايا الآلي.

ومع ذلك ، بالنسبة لمعظم الباحثين ، فإن السعر المرتبط بهذه الأدوات الكبيرة التي توضع على الطاولة عائقا أمام استخدامها. عداد خلايا الصولجان هو جهاز محمول آلي يوفر أتمتة ودقة عد الكوتر بتكلفة منخفضة نسبيا بتنسيق سهل الاستخدام. يستخدم النظام مبدأ كوتر للكشف عن الجسيمات القائمة على المعاوقة بتنسيق مصغر باستخدام مجموعة من الأجهزة التناظرية والرقمية لاستشعار معالجة الإشارات وتخزين البيانات والعرض الرسومي.

تم تصميم المستشعر القابل للتصرف بمنطقة استشعار خلوية دقيقة التصنيع تتيح التمييز حسب حجم الخلية وحجم الخلية بدقة أقل ميكرون ودقة بيكوليتر فرعية معززة بقنوات وإلكترونيات دقيقة لمعالجة السوائل. يعرض عداد الخلايا الصولجان بيانيا إحصائيات عدد الخلايا كرسم بياني لاستخدامه. يبدأ عداد الخلايا الصولجانية بتخفيف معلق خلية واحدة من الخلايا في محلول ملحي مخزن بالفوسفات.

تركيز 10 ، 000 إلى 500 ، 000 خلية لكل مليلتر هو الأمثل. انقل 100 ميكرولتر من الخلايا المخففة إلى أنبوب ميكروفيو سعة 1.5 ملليلتر. قم بتشغيل عداد خلايا الصولجان بالضغط مع الاستمرار على مفتاح التبديل الموجود في الجزء الخلفي من الجهاز وانتظر ظهور التعليمات التي تظهر على الشاشة.

عند المطالبة، قم بتوصيل مستشعر بنهاية وحدة الصولجان بحيث تكون لوحة استشعار القطب الكهربائي متجهة نحو مقدمة الجهاز. تتكون مستشعرات الصولجان من غرفة أخذ عينات مصبوبة بدقة مع منطقة استشعار إلكترونية وأقطاب استشعار خلوية متكاملة. تتيح المستشعرات تمييز حجم الخلية بدقة دون ميكرون وحجم الخلية بدقة بيكوليتر فرعية.

تضمن هندسة المستشعرات المتسقة حساب أحجام العينات المتساوية وإجراء قياسات دقيقة للحجم. بمجرد توصيل المستشعر ، قم بتنفيذ كل خطوة من خطوات عملية العد وفقا للتعليمات التي تظهر على الشاشة على النحو التالي. عندما تقرأ الشاشة ، اضغط باستمرار على المكبس لبدء الضغط على المكبس ، وستقوم الشاشة بعد ذلك بقراءة غمر المستشعر ، وغمر المستشعر في محلول تعليق الخلية ، وتحرير المكبس لشفط تعليق الخلية في المستشعر.

يعمل المكبس كإشارة كهربائية وسيسحب العينة بالإضافة إلى الحجم الميت إلى المستشعر. لا تهم سرعة أو دقة الغطس كما هو الحال مع سحب العينات. ستستغرق هذه العملية عدة ثوان عندما تكون جاهزة.

ستصدر الأداة صوتا وسيتم عرض العينة المحملة على الشاشة. بمجرد تحميل العينة في المستشعر ، يتم سحبها عبر منطقة الاستشعار لتقييم حجم الخلية وحجم الخلية. ثم من خلال القنوات الدقيقة ، بمجرد حساب 50 ميكرولترا من العينة ، يخبر المستشعر الجهاز بالتوقف عن العد.

بعد اكتمال العد ، ستقرأ شاشة العدادات العدد مكتمل. يرجى إزالة المستشعر وتجاهله. اتبع المطالبة وقم بإزالة المستشعر وتجاهله.

ستعرض الأداة بعد ذلك رسما بيانيا لحجم الخلية أو قطرها على شاشتها ، بالإضافة إلى تركيز الخلية لكل مليلتر. بعد اكتمال العد وعرض الرسم البياني على الأداة ، قم بتطبيق البوابات عن طريق الضغط على زر التبديل ، أو حدد البوابات التلقائية أو استخدم الأخير إما لضبط البوابة تلقائيا بناء على ملف تعريف الرسم البياني أو لاستخدام البوابات من العد السابق. بغض النظر عن التحديد ، يمكن نقل البوابات يدويا إلى الاختيار.

قم بضبط البيانات ، واضغط على زر التبديل مرة أخرى لتحديد البوابة اليسرى وقم بتمرير مفتاح التبديل لتحريك البوابة حسب الرغبة. ثم اضغط على مفتاح التبديل مرة أخرى لتنشيط البوابة اليمنى وقم بتمرير مفتاح التبديل لوضع البوابة اليمنى. انقر مرة أخرى.

سيتم عرض تركيز خلية جديد ومتوسط حجم الخلية وقطرها. يمكن أيضا أن يكون التبديل على أي من الجانبين لتبديل الشاشة بين التاريخ والوقت ، ومتوسط حجم الخلية ، ومتوسط حجم الخلية الذي يصل إلى 72 رسم بياني يمكن تخزينه على الأداة نفسها. لتحميل البيانات إلى جهاز كمبيوتر شخصي ، قم بتوصيل الجهاز عبر منفذ كابل USB ، على شاشة العرض على جهاز الكمبيوتر.

انقر نقرا مزدوجا فوق تطبيق برنامج الصولجان لتشغيل البرنامج. ثم انقر فوق اتصال. سيتم نقل جميع التهم تلقائيا إلى البرنامج.

يعرض برنامج تطبيق الصولجان الرسم البياني الذي يوضح بالتفصيل التوزيع السكاني للثقافة إما في الحجم أو القطر. يمكن بعد ذلك تصدير الملفات التي تم تنزيلها إلى Microsoft Excel ، حيث سيتم عرض البيانات الأولية في صناديق بأقطار خلايا محددة أو وحدات تخزين خلايا. تم إعداد 19 خطا خلويا مختلفا للعد وتم تحديد تركيزات البداية النظرية باستخدام عداد الزجاج.

ثم تم تخفيف معلقات الخلايا هذه للحصول على معلقات الخلية بتركيزات الخلايا النظرية. ثم تم استخدام عداد الخلايا الصولجان لتحديد تركيزات الخلايا. يوضح هذا الشكل خمسة تخفيفات تم قياسها لخمسة خطوط خلوية تمثيلية جنبا إلى جنب مع التركيز النظري للخلية.

توضح الدرجة العالية من الخطية ، كما هو موضح في قيم r-squared ، أن عد الصولجان هو طريقة موثوقة لخطوط الخلايا التي تم اختبارها عبر نطاق تشغيل خطي واسع. يتم توضيح الدقة النسبية الإجمالية لعد الصولجان هنا حيث تتم مقارنة البيانات التي تم الحصول عليها من عد الصولجان مع الأعداد التي تم الحصول عليها من عد الكوتر. يتم رسم سجل عدد خلايا الصولجان مقابل سجل أعداد الكوتر ويظهر أنه عبر جميع خطوط الخلايا التي تم اختبارها يتطابق عدد الصولجان.

تم إجراء تعداد 19 خطا خلويا باستخدام عداد Z ثنائي كولتر. تم إجراء عداد خلايا الصولجان ، وعداد آلي قائم على الرؤية ، مثل نظام اختبار الخلايا V أو العد ، وتعداد TER hemo وفقا لتعليمات الشركة المصنعة باستخدام نفس تعليق بدء الخلية والتخفيفات المتطابقة. توضح النتائج الموضحة في هذا الشكل أن تركيزات الخلايا المقاسة عن طريق عد الصولجان تتطابق بشكل وثيق مع تركيزات الخلايا النظرية ذات الخطية العالية.

تم حساب معامل التباين أو السيرة الذاتية لكل تخفيف لكل خط خلية. لكل نظام عد موضح هنا هو متوسط النسبة المئوية CVS على 19 خط خلية فيما يتعلق بتركيز الخلية وطريقة العد ضمن نطاق التشغيل. يعتبر عداد الخلايا الصولجان أكثر دقة من عد مقياس الخلوي الدموي ، حيث يعرض انحرافات معيارية أصغر ومعاملات تباين متوسطة أصغر.

يعد عد الصولجان أسرع 10 مرات من قياس الدم الخلوي وأسرع من العدادات الآلية الأخرى أيضا. هنا تم حساب SF تسعة و MCF سبعة و HC 2 93 خلية باستخدام الطرق الموضحة في هذا الفيديو. تم تسجيل متوسط الوقت اللازم لقياس تركيز الخلية.

لاحظ أن قياس الدم الخلوي تم إجراؤه مرة واحدة فقط لكل عينة. يقوم الصولجان بإجراء القياسات بناء على حجم الخلية. وبالتالي ، يمكن التقاط أي تغييرات في التشكل الخلوي في الرسم البياني.

تظهر الثقافات الصحية توزيعا غاوسيا لطيفا على شكل جرس بينما تتسبب الخلايا غير الصحية في القمل وتسبب تحولا في الرسم البياني إلى اليسار. وبالمثل ، عندما تم خلط مجموعة من 50٪ من الخلايا الميتة مع 50٪ من الخلايا الحية ، لوحظت أيضا تحولات الرسم البياني لقد أوضحت لكم للتو كيفية استخدام عداد خلايا الصولجان الجديد للمليبور ، والذي يحدث ثورة في الطريقة التي يحسب بها الباحثون خلاياهم.